| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 第一章 综述 | 第14-35页 |
| 第一节 柑橘转基因研究进展 | 第14-26页 |
| 1 植物转基因历史和现状 | 第14页 |
| 2 转基因方法 | 第14-20页 |
| 2．1 DNA直接导入法 | 第15-16页 |
| 2．1．1 化学诱导的DNA直接转化法 | 第15-16页 |
| 2．1．2 物理诱导的DNA直接转化法 | 第16页 |
| 2．2 载体介导的DNA导入法 | 第16-20页 |
| 2．2．1 根癌农杆菌的生物学特性 | 第16-17页 |
| 2．2．2 根癌农杆菌 Ti质粒的结构和功能 | 第17页 |
| 2．2．3 根癌农杆菌介导的T- DNA在植物中的转化 | 第17-18页 |
| 2．2．4 农杆菌 T- DNA质粒载体系统 | 第18页 |
| 2．2．5 影响农杆菌转化效率的因素 | 第18-20页 |
| 2．2．5．1 农杆菌菌株的选择 | 第18-19页 |
| 2．2．5．2 诱导条件的选择 | 第19-20页 |
| 2．2．5．3 外植体的选择和预处理 | 第20页 |
| 2．2．5．4 抗生素的选择 | 第20页 |
| 3 柑橘遗传转化发展现状及存在的问题 | 第20-26页 |
| 3．1 柑橘遗传转化发展现状 | 第20-24页 |
| 3．2 柑橘遗传转化存在的问题 | 第24-26页 |
| 3．2．1 转化中使用的外植体类型 | 第24页 |
| 3．2．2 抗性芽的生根 | 第24-25页 |
| 3．2．3 转化使用的目的基因 | 第25-26页 |
| 第二节 植物抗寒基因工程 | 第26-33页 |
| 1 抗冻蛋白 | 第26-27页 |
| 2 小分子渗透调节剂 | 第27-28页 |
| 3 脂肪酸去饱和酶 | 第28页 |
| 4 抗氧化酶 | 第28-29页 |
| 5 抗寒锻炼相关基因 | 第29-32页 |
| 6 柑橘抗寒育种研究进展和局限性 | 第32-33页 |
| 第三节 课题的提出 | 第33-35页 |
| 1 柑橘抗寒基因工程育种研究的必要性 | 第33-34页 |
| 2 本研究的目的意义 | 第34-35页 |
| 第二章 尤力克柠檬组织培养体系的建立 | 第35-42页 |
| 1 前言 | 第35-36页 |
| 2 材料和方法 | 第36页 |
| 2．1 不同外植体不定芽再生的诱导 | 第36页 |
| 2．2 上胚轴不定芽诱导条件的优化 | 第36页 |
| 2．3 不定芽生根 | 第36页 |
| 2．4 培养条件 | 第36页 |
| 3 结果 | 第36-40页 |
| 3．1 不同外植体的不定芽再生率 | 第36-37页 |
| 3．2 植物生长调节剂对不定芽再生的影响 | 第37-38页 |
| 3．3 暗培养对柠檬上胚轴切段不定芽再生的影响 | 第38-39页 |
| 3．4 不定芽生根 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 纽荷尔脐橙成年茎段器官直接发生途径再生不定芽 | 第42-48页 |
| 1 前言 | 第42页 |
| 2 材料和方法 | 第42-43页 |
| 2．1 材料 | 第42页 |
| 2．2 培养条件 | 第42-43页 |
| 2．3 实验设置和数据处理 | 第43页 |
| 3 结果 | 第43-46页 |
| 3．1 外植体、光照以及 BAP和 NAA对不定芽再生影响 | 第43-45页 |
| 3．2 不定芽生根 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 植物抗寒基因的克隆以及植物表达载体的构建 | 第48-66页 |
| 1 前言 | 第48-49页 |
| 2 材料和方法 | 第49-51页 |
| 2．1 实验材料 | 第49页 |
| 2．1．1 植物材料 | 第49页 |
| 2．1．2 菌株、质粒以及实验药品 | 第49页 |
| 2．2 方法 | 第49-51页 |
| 2．2．1 积壳叶片总 DNA的提取 | 第49页 |
| 2．2．2 设计兼并引物扩增枳壳 GPAT基因片段 | 第49页 |
| 2．2．3 扩增GPAT基因片段的条件 | 第49页 |
| 2．2．4 总RNA的提取 | 第49页 |
| 2．2．5 cDNA的合成 | 第49-50页 |
| 2．2．6 PCR扩增ICE1编码区 | 第50页 |
| 2．2．7 扩增产物的克隆以及序列分析 | 第50页 |
| 2．2．8 质粒提取 | 第50页 |
| 2．2．9 ICE1基因表达载体的构建 | 第50页 |
| 2．2．10 pMVICE1转化农杆菌 | 第50-51页 |
| 3 结果 | 第51-64页 |
| 3．1 枳壳 GPAT基因的引物设计 | 第51-52页 |
| 3．2 枳壳 GPAT基因片段的扩增和序列分析 | 第52-53页 |
| 3．3 拟南芥 RNA的提取与 RT-PCR扩增ICE1基因片段 | 第53-54页 |
| 3．4 ICE1基因片段序列测定和分析 | 第54-63页 |
| 3．5 ICE1基因的酶切及表达载体的构建 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 第五章 根癌农杆菌介导的柠檬上胚轴转化 ICE1基因研究 | 第66-79页 |
| 1 前言 | 第66页 |
| 2 材料和方法 | 第66-69页 |
| 2．1 实验材料 | 第66-67页 |
| 2．1．1 供试植物材料 | 第66页 |
| 2．1．2 农杆菌和质粒 | 第66-67页 |
| 2．1．3 主要生化试剂 | 第67页 |
| 2．2 培养条件及不同的培养基配方 | 第67页 |
| 2．3 实验方法 | 第67-69页 |
| 2．3．1 柠檬上胚轴对卡那霉素、头孢霉素敏感性 | 第67页 |
| 2．3．2 菌液的准备 | 第67-68页 |
| 2．3．3 柠檬上胚轴遗传转化过程 | 第68页 |
| 2．3．4 遗传转化条件的选择 | 第68页 |
| 2．3．5 抗性芽的生根与移栽 | 第68页 |
| 2．3．6 PCR鉴定 | 第68-69页 |
| 2．3．7 转化效率的数据统计 | 第69页 |
| 2．3．8 Southern杂交验证 | 第69页 |
| 3 结果 | 第69-74页 |
| 3．1 抗生素对柠檬上胚轴不定芽再生的影响 | 第69-70页 |
| 3．2 影响柠檬上胚轴转化效率的因素分析 | 第70-73页 |
| 3．2．1 外植体苗龄 | 第70页 |
| 3．2．2 外植体预培养时间 | 第70-71页 |
| 3．2．3 外植体在农杆菌中的侵染时间 | 第71页 |
| 3．2．4 乙酰丁香酮浓度 | 第71-72页 |
| 3．2．5 共培养时间 | 第72页 |
| 3．2．6 共培养温度 | 第72-73页 |
| 3．2．7 共培养培养基 | 第73页 |
| 3．3 柠檬上胚轴的转化及植株再生 | 第73-74页 |
| 3．4 转化植株的分子检测 | 第74页 |
| 4 讨论 | 第74-79页 |
| 第六章 问题和展望 | 第79-83页 |
| 1 柑橘理想的转化系统 | 第79页 |
| 2 柑橘转基因育种 | 第79-80页 |
| 3 柑橘转化中使用外植体 | 第80页 |
| 4 转化中目的基因的讨论 | 第80-81页 |
| 5 柑橘抗寒基因工程 | 第81-82页 |
| 6 转基因安全性的讨论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-94页 |
| 附录Ⅰ 常用分子生物学操作 | 第94-99页 |
| 附录Ⅱ 博士在读期间发表的文章 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100页 |
