| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-6页 |
| 縮略词表 | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-26页 |
| ·miRNA研究现状 | 第11-24页 |
| ·植物miRNA的发现 | 第11-13页 |
| ·植物miRNA的生物合成 | 第13-14页 |
| ·植物miRNA的特点 | 第14-15页 |
| ·植物miRNA的鉴定 | 第15-18页 |
| ·传统的测序分析方法 | 第16页 |
| ·高通量测序分析方法 | 第16-17页 |
| ·生物信息学分析方法 | 第17-18页 |
| ·植物miRNA的验证 | 第18-19页 |
| ·Northern blotting | 第18-19页 |
| ·Stem-loop qRT-PCR | 第19页 |
| ·miRNA基因芯片 | 第19页 |
| ·植物miRNA靶基因的预测及验证 | 第19-21页 |
| ·植物miRNA靶基因的预测 | 第20页 |
| ·植物miRNA靶基因的验证 | 第20-21页 |
| ·植物miRNA的生物学功能 | 第21-24页 |
| ·植物miRNA与生长发育的关系 | 第22-23页 |
| ·植物miRNA与逆境的关系 | 第23-24页 |
| ·研究的目的意义 | 第24-26页 |
| 2 胡杨Peu-miR156j和Peu-miR169o成熟体的表达分析 | 第26-34页 |
| ·材料与方法 | 第26-29页 |
| ·植物材料处理 | 第26页 |
| ·脱水和高盐胁迫处理下胡杨Peu-miR156j和Peu-miR169o的表达分析 | 第26-29页 |
| ·CTAB-Tris法提取胡杨总RNA | 第26-27页 |
| ·胡杨Peu-miR156j和Peu-mi169o半定量RT-PCR及实时定量RT-PCR引物设计 | 第27-28页 |
| ·胡杨Peu-miR156j和Peu-miR169o成熟体的反转录(RT)反应 | 第28-29页 |
| ·胡杨Peu-miR156j和Peu-miR169o的半定量及实时荧光定量PCR反应 | 第29页 |
| ·实时荧光定量PCR数据标准化处理 | 第29页 |
| ·结果与分析 | 第29-33页 |
| ·胡杨Peu-miR156j和Peu-miR169o成熟体的实时荧光定量数据处理 | 第29-32页 |
| ·胡杨成熟体Peu-miR156j和Peu-miR169o成熟体的半定量RT-PCR处理 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| 3 胡杨PEU-MIR156J和PEU-MIR1690转基因及功能验证 | 第34-59页 |
| ·胡杨Peu-miR156j和Peu-miR169o的克隆及分析 | 第34-40页 |
| ·材料与方法 | 第34-35页 |
| ·植物材料 | 第34页 |
| ·仪器和试剂 | 第34页 |
| ·培养基及抗生索 | 第34-35页 |
| ·胡杨Peu-miR156j和Peu-miR169o的克隆 | 第35-38页 |
| ·胡杨总DNA提取 | 第35页 |
| ·PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·目的片段的回收与纯化 | 第36-37页 |
| ·目的片段连入载体 | 第37-38页 |
| ·转化 | 第38页 |
| ·大肠杆菌单克隆送测 | 第38页 |
| ·胡杨Peu-miR156j和Peu-miR169o基因分析 | 第38页 |
| ·比对与分析 | 第38-40页 |
| ·胡杨Peu-miR156j和Peu-miR169o前体DNA序列比对 | 第38-39页 |
| ·胡杨Peu-miR156j和Peu-miR169o前体二级结构分析 | 第39-40页 |
| ·目的基因的酶切与农杆菌转化 | 第40-45页 |
| ·实验材料及试剂 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-45页 |
| ·连入酶切位点的目的基因 | 第41-42页 |
| ·DNA的回收与纯化 | 第42页 |
| ·目的片段与pMD19-T Simple Vector载体连接 | 第42页 |
| ·转化大肠杆菌感受态 | 第42页 |
| ·大肠杆菌阳性克隆的PCR鉴定 | 第42页 |
| ·质粒DNA提收 | 第42-43页 |
| ·双酶切及连接体系 | 第43-44页 |
| ·转化、PCR检测及质粒提取 | 第44页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备及农杆菌转化 | 第44页 |
| ·农杆菌菌液PCR检测 | 第44-45页 |
| ·农杆菌的活化与培养 | 第45页 |
| ·胡杨Peu-miR156j和Peu-miR169o基因转化拟南芥 | 第45-49页 |
| ·实验材料 | 第45页 |
| ·拟南芥的播种与管理 | 第45-46页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥侵染转化 | 第46-47页 |
| ·转基因植株的筛选与检测 | 第47-49页 |
| ·转基因植株的筛选 | 第47页 |
| ·转基因拟南芥分子检测 | 第47-48页 |
| ·T3代转基因拟南芥植株功能鉴定 | 第48页 |
| ·靶基因预测 | 第48页 |
| ·靶基因表达分析 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-57页 |
| ·胡杨Peu-miRl56j和Peu-miR169o的克隆及载体构建 | 第49-50页 |
| ·T1代转基因拟南芥的分子鉴定 | 第50页 |
| ·35S：MIR156j转基因植株的表型 | 第50-51页 |
| ·35S：MIR156j和35S：MIR169o转基因植株抗盐性检测 | 第51-54页 |
| ·35S：MIR156j转基因与野生型拟南芥在盐处理及空MS处理下的萌发率 | 第51-52页 |
| ·355：MIR169o转基因与野生型拟南芥在盐处理及空MS处理下的萌发率 | 第52-54页 |
| ·miR156j和miR169o在拟南芥中靶基因的预测及表达分析 | 第54-57页 |
| ·miR156j在拟南芥中靶基因的预测及表达分析 | 第54-55页 |
| ·miR169o在拟南芥中靶基因的预测及表达分析 | 第55-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 4 结论与展望 | 第59-61页 |
| ·结论 | 第59-60页 |
| ·展望 | 第60-61页 |
| ·创新点 | 第60页 |
| ·进一步研究的内容 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 个人简介 | 第68页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第68-69页 |
| 导师简介 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
