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XBP-1能提高雌激素受体ERα的转录活性

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-10页
1 、 前言第10-15页
2 、 材料与方法第15-25页
   ·材料第15-17页
     ·引物合成及序列测定第15页
     ·菌株、细胞株第15页
     ·质粒第15页
     ·分子生物学工具酶第15页
     ·常用分子生物学试剂盒第15-16页
     ·细胞培养试剂第16页
     ·抗体第16页
     ·常规无机盐试剂均购自军事医学科学院院条件处,主要为国产分析纯。第16页
     ·大型仪器第16-17页
   ·方法第17-25页
     ·载体的构建第17-19页
     ·哺乳动物细胞的转染第19页
     ·Western blot分析第19-20页
     ·免疫共沉淀第20页
     ·GST-ERα融合蛋白在大肠杆菌中的表达第20-21页
     ·GST沉淀(pull-down)分析第21页
     ·荧光素酶和β-半乳糖苷酶活性测定第21-22页
     ·ERα和AR转录活性的测定第22页
     ·反转录PCR(RT-PCR)第22-23页
     ·凝胶阻滞实验(Gel shift)第23-25页
3 、 结果第25-41页
   ·重组质粒的构建第25-26页
     ·XBP-1两种剪切形式重组质粒的构建第25页
     ·XBP-1两种剪切形式重组质粒的鉴定第25-26页
   ·重组质粒在哺乳动物细胞中的表达第26-27页
   ·XBP-1对ERα转录活性的影响第27-34页
     ·XBP-1能提高ERα转录活性第27-29页
     ·XBP-1高效增强ERE-LUC的活性依赖于ERα第29-30页
     ·XBP-1增强ERα转录活性具有特异性第30-32页
     ·XBP-1对ERα的N端和C端转录活性的影响第32-33页
     ·抗雌激素不同程度降低XBP-1的调节作用第33-34页
     ·XBP-1和SRC-1对ERα的协同激活作用第34页
   ·XBP-1与ERα在体内外的相互作用第34-38页
     ·XBP-1与ERα在体内的相互作用第34-35页
     ·XBP-1与ERα在体外的相互作用第35-36页
     ·与XBP-1结合的ERα区域的定位第36-37页
     ·与ERα结合的XBP-1S和XBP-1U区域的定位第37页
     ·XBP-1的N端是增强ERα的转录活性是必需的第37-38页
   ·XBP-1S和XBP-1U都不直接与ERE结合第38-39页
   ·XBP-1S和XBP-1U在乳腺癌细胞株中的表达第39-41页
4 、 讨论第41-44页
5 、 结论及展望第44-45页
6 、 参考文献第45-52页
7 、 附录第52-57页
   ·克隆第52-53页
   ·引物第53-54页
   ·缓冲液第54-57页
8 、 缩写词第57-59页
9 、 攻读硕士学位期间发表文章第59-60页
致谢第60页

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