摘要 | 第1-7页 |
ABSTRACT | 第7-10页 |
1 、 前言 | 第10-15页 |
2 、 材料与方法 | 第15-25页 |
·材料 | 第15-17页 |
·引物合成及序列测定 | 第15页 |
·菌株、细胞株 | 第15页 |
·质粒 | 第15页 |
·分子生物学工具酶 | 第15页 |
·常用分子生物学试剂盒 | 第15-16页 |
·细胞培养试剂 | 第16页 |
·抗体 | 第16页 |
·常规无机盐试剂均购自军事医学科学院院条件处,主要为国产分析纯。 | 第16页 |
·大型仪器 | 第16-17页 |
·方法 | 第17-25页 |
·载体的构建 | 第17-19页 |
·哺乳动物细胞的转染 | 第19页 |
·Western blot分析 | 第19-20页 |
·免疫共沉淀 | 第20页 |
·GST-ERα融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第20-21页 |
·GST沉淀(pull-down)分析 | 第21页 |
·荧光素酶和β-半乳糖苷酶活性测定 | 第21-22页 |
·ERα和AR转录活性的测定 | 第22页 |
·反转录PCR(RT-PCR) | 第22-23页 |
·凝胶阻滞实验(Gel shift) | 第23-25页 |
3 、 结果 | 第25-41页 |
·重组质粒的构建 | 第25-26页 |
·XBP-1两种剪切形式重组质粒的构建 | 第25页 |
·XBP-1两种剪切形式重组质粒的鉴定 | 第25-26页 |
·重组质粒在哺乳动物细胞中的表达 | 第26-27页 |
·XBP-1对ERα转录活性的影响 | 第27-34页 |
·XBP-1能提高ERα转录活性 | 第27-29页 |
·XBP-1高效增强ERE-LUC的活性依赖于ERα | 第29-30页 |
·XBP-1增强ERα转录活性具有特异性 | 第30-32页 |
·XBP-1对ERα的N端和C端转录活性的影响 | 第32-33页 |
·抗雌激素不同程度降低XBP-1的调节作用 | 第33-34页 |
·XBP-1和SRC-1对ERα的协同激活作用 | 第34页 |
·XBP-1与ERα在体内外的相互作用 | 第34-38页 |
·XBP-1与ERα在体内的相互作用 | 第34-35页 |
·XBP-1与ERα在体外的相互作用 | 第35-36页 |
·与XBP-1结合的ERα区域的定位 | 第36-37页 |
·与ERα结合的XBP-1S和XBP-1U区域的定位 | 第37页 |
·XBP-1的N端是增强ERα的转录活性是必需的 | 第37-38页 |
·XBP-1S和XBP-1U都不直接与ERE结合 | 第38-39页 |
·XBP-1S和XBP-1U在乳腺癌细胞株中的表达 | 第39-41页 |
4 、 讨论 | 第41-44页 |
5 、 结论及展望 | 第44-45页 |
6 、 参考文献 | 第45-52页 |
7 、 附录 | 第52-57页 |
·克隆 | 第52-53页 |
·引物 | 第53-54页 |
·缓冲液 | 第54-57页 |
8 、 缩写词 | 第57-59页 |
9 、 攻读硕士学位期间发表文章 | 第59-60页 |
致谢 | 第60页 |