| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 1 前言 | 第10-22页 |
| ·RIP的定义及分类 | 第10-11页 |
| ·RIP的合成 | 第11页 |
| ·RIP的酶学活性 | 第11-13页 |
| ·RNA N-糖苷酶活性 | 第11-12页 |
| ·RNA水解酶活性 | 第12页 |
| ·DNA裂解酶活性 | 第12-13页 |
| ·SOD活性 | 第13页 |
| ·RIP的生物学活性 | 第13-16页 |
| ·抗生育活性 | 第13-14页 |
| ·抗艾滋病病毒活性 | 第14页 |
| ·肿瘤细胞毒性 | 第14-16页 |
| ·抗病原真菌活性 | 第16页 |
| ·抗植物病毒活性 | 第16页 |
| ·RIP的转基因植物研究 | 第16-21页 |
| ·抗病毒活性研究 | 第17-18页 |
| ·抗真菌活性研究 | 第18-20页 |
| ·抗虫性研究 | 第20页 |
| ·转化植株生物学性状研究 | 第20-21页 |
| ·本研究的立题思想 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-37页 |
| ·基因、菌株、生化试剂、引物和水稻品种 | 第22页 |
| ·供试培养基的配制 | 第22-24页 |
| ·组织培养培养基 | 第22-23页 |
| ·细菌培养基 | 第23-24页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第24-27页 |
| ·质粒的提取 | 第24页 |
| ·PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·目的条带的纯化 | 第25页 |
| ·克隆载体pMD-18T的连接 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·反应物对宿主感受态细胞的转化 | 第25-26页 |
| ·克隆载体的双酶切鉴定 | 第26页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·根癌农杆菌的转化 | 第27-28页 |
| ·重组根癌农杆菌的构建 | 第27页 |
| ·重组根癌农杆菌的PCR鉴定 | 第27-28页 |
| ·根癌农杆菌介导转化水稻 | 第28-29页 |
| ·水稻胚性愈伤组织的诱导 | 第28页 |
| ·根癌农杆菌的活化 | 第28-29页 |
| ·愈伤组织与根癌农杆菌的共培养转化 | 第29页 |
| ·洗菌 | 第29页 |
| ·抗性愈伤的筛选 | 第29页 |
| ·转基因植株的再生 | 第29页 |
| ·转化植株的分子检测 | 第29-35页 |
| ·外源基因整合的初步检测 | 第30-33页 |
| ·植物组织总DNA的提取 | 第30-31页 |
| ·转化植株的PCR检测 | 第31页 |
| ·转化植株的Southern dot blot | 第31-32页 |
| ·转化植株的PCR-Southern blot | 第32-33页 |
| ·外源基因转录的初步检测 | 第33-34页 |
| ·转化植株的RT-PCR | 第33-34页 |
| ·总RNA的提取 | 第33页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第33-34页 |
| ·转化植株的RT-PCR-Southern dot blot | 第34页 |
| ·转化植株的RT-PCR-Southern blot | 第34-35页 |
| ·T_1代植株的潮霉素抗性检测 | 第35页 |
| ·RIP-GST融合蛋白的抗血清的制备 | 第35-37页 |
| ·RIP-GST融合蛋白的IPTG诱导 | 第35页 |
| ·RIP-GST融合蛋白的SDS-PAGE | 第35页 |
| ·RIP-GST融合蛋白抗血清的制备 | 第35-36页 |
| ·抗血清的分离与保存 | 第36页 |
| ·效价的测定 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-52页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第37页 |
| ·RIP基因的PCR产物及重组克隆的筛选与鉴定 | 第37页 |
| ·重组植物表达载体的构建 | 第37页 |
| ·根癌农杆菌的转化 | 第37-39页 |
| ·水稻愈伤的转化 | 第39-45页 |
| ·水稻胚性愈伤组织的诱导 | 第39页 |
| ·愈伤组织与重组农杆菌的共培养 | 第39-40页 |
| ·抗性愈伤的筛选 | 第40-41页 |
| ·抗性愈伤的再生、生根壮苗及移栽 | 第41-45页 |
| ·T_0代植株的分子检测 | 第45-49页 |
| ·外源基因整合的初步检测 | 第45-47页 |
| ·转化植株的PCR检测 | 第45页 |
| ·转化植株的Southern dot blot检测 | 第45页 |
| ·转化植株的PCR-Southern blot检测 | 第45-47页 |
| ·转化植株外源基因转录的检测 | 第47-49页 |
| ·T1代植株的潮霉素抗性检测 | 第49-50页 |
| ·RIP-GST融合蛋白抗血清的制备 | 第50-52页 |
| ·RIP-GST融合蛋白的SDS-PAGE | 第50-51页 |
| ·RIP-GST融合蛋白抗血清效价的测定 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-56页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第52页 |
| ·重组农杆菌的构建 | 第52页 |
| ·水稻的转化 | 第52-54页 |
| ·共培养 | 第52-53页 |
| ·受体组织 | 第53页 |
| ·转化植株的再生和移栽 | 第53-54页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第54页 |
| ·转基因的遗传效应 | 第54-56页 |
| 5 小结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 附录1 pCAMBIA1300植物表达载体示意图 | 第66-67页 |
| 附录2 植物表达载体pCA1300-RIP的构建过程 | 第67-69页 |
| 附录3 攻读硕士学位期间撰写的论文 | 第69-70页 |
| 附录4 原创性声明 | 第70页 |
