| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-7页 |
| 第一章 、 前言 | 第7-19页 |
| 1 、 植酸与植酸酶 | 第7-11页 |
| 2 、 植酸酶在基因工程方面的研究进展 | 第11-16页 |
| 3 、 实验思路 | 第16-17页 |
| 4 、 关于实验所用表达系统的介绍 | 第17-19页 |
| 第二章 、 材料与方法 | 第19-32页 |
| 一、 实验材料 | 第19-23页 |
| 1 、 主要实验设备 | 第19-20页 |
| 2 、 主要试剂 | 第20页 |
| 3 、 菌种和质粒 | 第20-21页 |
| 4 、 常用试剂的配制 | 第21-23页 |
| 二、 实验方法 | 第23-32页 |
| 1 、 碱裂解法抽提质粒DNA | 第23页 |
| 2 、 质粒DNA的乙醇法浓缩 | 第23页 |
| 3 、 引物设计寡核苷酸合成 | 第23-24页 |
| 4 、 普通PCR的方法 | 第24页 |
| 5 、 致突变PCR的方法 | 第24-25页 |
| 6 、 质粒DNA的限制性内切酶酶切 | 第25页 |
| 7 、 质粒酶切后的去磷酸化处理 | 第25-26页 |
| 8 、 DNA连接反应 | 第26页 |
| 9 、 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| 10 、 重组DNA的转化 | 第27页 |
| 11 、 重组质粒的鉴定 | 第27页 |
| 12 、 外源基因在大肠杆菌中的表达 | 第27-28页 |
| 13 、 SDS--PAGE | 第28-29页 |
| 14 、 表达产物的纯化 | 第29-30页 |
| 15 、 包涵体蛋白的复性方法 | 第30-31页 |
| 16 、 酶活力的测定方法 | 第31页 |
| 17 、 蛋白质浓度测定 | 第31页 |
| 18 、 植酸酶热稳定性的检测方法 | 第31-32页 |
| 第三章 、 结果与讨论 | 第32-61页 |
| 一、 实验结果 | 第32-49页 |
| 1 、 PMD4.21质粒的鉴定 | 第32-33页 |
| 2 、 植酸酶基因phyA的PCR扩增 | 第33页 |
| 3 、 植酸酶基因phyA的突变 | 第33-36页 |
| 4 、 原核表达系统的建立 | 第36-40页 |
| 5 、 重组载体表达蛋白的表达量和生物活性的比较研究 | 第40-46页 |
| 6 、 工程菌PET21a(+)-phyA／BL21(DE3)表达植酸酶蛋白热稳定性的研究 | 第46-48页 |
| 7 突变植酸酶蛋白的基因测序结果 | 第48-49页 |
| 二、 讨论 | 第49-61页 |
| 1 、 关于基因突变方法的讨论 | 第49-51页 |
| 2 、 关于植酸酶结构与性质的讨论 | 第51-57页 |
| 3 、 包涵体复性问题的讨论 | 第57-60页 |
| 4 突变植酸酶蛋白的价值 | 第60-61页 |
| 第四章 、 结论与展望 | 第61-63页 |
| 附图 | 第63-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 在学期间发表的论文 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |