| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-8页 |
| 第一部分 文献综述 | 第8-24页 |
| 第一章 猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展 | 第8-24页 |
| 1 PRRSV体外生长特点 | 第8-9页 |
| 2 基因组组成 | 第9-12页 |
| 3 PRRSV欧洲型和北美型毒株间序列差异性 | 第12页 |
| 4 结构蛋白 | 第12-14页 |
| 5 病毒蛋白的抗原性 | 第14-15页 |
| 6 感染性cDNA克隆 | 第15-16页 |
| 7 结论 | 第16-17页 |
| 参考文献 | 第17-23页 |
| 英文摘要 | 第23-24页 |
| 第二部分 研究内容 | 第24-56页 |
| 第二章 猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因的克隆、表达、纯化和鉴定 | 第24-44页 |
| 一 材料 | 第24-25页 |
| 二 方法 | 第25-33页 |
| 1 引物设计 | 第25页 |
| 2 pBV-MN质粒的提取与鉴定 | 第25-27页 |
| 2．1 感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| 2．2 质粒的转化 | 第26页 |
| 2．3 质粒的小量提取 | 第26-27页 |
| 2．4 质粒的鉴定 | 第27页 |
| 3 N蛋白基因的PCR扩增 | 第27页 |
| 3．1 反应体系 | 第27页 |
| 3．2 反应条件 | 第27页 |
| 4 PCR产物的凝胶电泳 | 第27-28页 |
| 5 PCR产物的纯化 | 第28页 |
| 6 PRRSVN蛋白基因的亚克隆 | 第28-30页 |
| 6．1 pRSET A质粒的扩增与提取 | 第28页 |
| 6．2 pRSET A质粒酶切反应 | 第28页 |
| 6．3 PRRSV N蛋白基因的酶切反应 | 第28页 |
| 6．4 质粒和PCR产物的回收 | 第28-29页 |
| 6．5 连接反应 | 第29页 |
| 6．6 感受态细胞制备 | 第29页 |
| 6．7 连接混合物的转化 | 第29页 |
| 6．8 恢复转化曲 | 第29页 |
| 6．9 重组质粒的酶切鉴定 | 第29-30页 |
| 6．10 重组质粒的PCR鉴定 | 第30页 |
| 7 核衣壳蛋白（N蛋白）在大肠杆菌中的表达与鉴定 | 第30-32页 |
| 7．1 感受态细胞的制备 | 第30页 |
| 7．2 质粒转化 | 第30页 |
| 7．3 重组质粒的诱导表达 | 第30-31页 |
| 7．4 Western-Blot试验 | 第31-32页 |
| 8 重组N蛋白的纯化 | 第32页 |
| 8．1 重组N蛋白的诱导表达 | 第32页 |
| 8．2 变性细菌裂解物的制备 | 第32页 |
| 8．3 细菌裂解物与纯化柱的结合 | 第32页 |
| 8．4 变性条件下纯化柱的洗涤和重组蛋白质的洗脱 | 第32页 |
| 9 蛋白质浓度测定 | 第32-33页 |
| 三 结果 | 第33-37页 |
| 1 pBV-MN质粒鉴定 | 第33页 |
| 2 核农壳蛋白（N蛋白）基因的克隆 | 第33-34页 |
| 3 pRSET A酶切反应结果 | 第34页 |
| 4 pRSET-N重组质粒的构建与鉴定 | 第34-35页 |
| 5 SDS-PAGE分析诱导表达的蛋白质条带 | 第35页 |
| 6 Western-Blot分析 | 第35-36页 |
| 7 N蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| 8 免疫原性测定 | 第37页 |
| 四 讨论 | 第37-41页 |
| 参考文献 | 第41-42页 |
| pRSET-N重组质粒的构建策略 | 第42-43页 |
| 英文摘要 | 第43-44页 |
| 第三章 猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因真核表达质粒的构建与鉴定 | 第44-56页 |
| 一 材料 | 第44-45页 |
| 二 方法 | 第45-48页 |
| 1 N蛋白基因的PCR扩增@40 | 第45页 |
| 2 pcDNA-N真核表达重组质粒的构建 | 第45-46页 |
| 2．1 pcDNA 3质粒的扩增与提取 | 第45页 |
| 2．2 pcDNA 3质粒酶切反应 | 第45页 |
| 2．3 PRRSV N蛋白基因的酶切反应 | 第45页 |
| 2．4 质粒和PCR酶切产物的回收 | 第45页 |
| 2．5 连接反应 | 第45-46页 |
| 2．6 感受态细胞制备 | 第46页 |
| 2．7 连接混合物的转化 | 第46页 |
| 2．8 恢复转化菌 | 第46页 |
| 2．9 重组质粒的酶切鉴定 | 第46页 |
| 2．10 重组质粒的PCR鉴定 | 第46页 |
| 3 重组质粒的大量提取与纯化 | 第46-47页 |
| 4 重组表达质粒pcDNA-N磷酸钙转染COS-7细胞及其表达产物的检测 | 第47-48页 |
| 4．1 PRRSV感染Marc145细胞 | 第47-48页 |
| 4．2 磷酸钙转染COS-7细胞 | 第48页 |
| 4．3 转染细胞的固定 | 第48页 |
| 4．4 间接荧光染色 | 第48页 |
| 三 结果 | 第48-51页 |
| 1 N蛋白真核表达质粒的构建 | 第48-49页 |
| 2 pcDNA-N重组质粒的纯化 | 第49-50页 |
| 3 纯化的pcDNA-N重组质粒的浓度和纯度测定 | 第50页 |
| 4 N蛋白重组质粒在COS-7细胞中的表达 | 第50-51页 |
| 四讨论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-54页 |
| pcDNA-N重组质粒的构建策略 | 第54-55页 |
| 英文摘要 | 第55-56页 |
| 全文总结 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
