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白菜类蔬菜叶球发育相关基因的分子克隆及其转基因植物研究

中文摘要第1-12页
英文摘要第12-15页
综述第15-58页
 第一部分 叶球发育机理第16-22页
  1.1 植物的器官分化和器官异态第16页
  1.2 大白菜的进化过程及叶球发育第16-17页
  1.3 大白菜叶球形成的机理第17-21页
   1.3.1 形态学机理第17页
   1.3.2 分化起源学说第17页
   1.3.3 杂交起源学说第17-18页
   1.3.4 生理机制第18页
   1.3.5 生态生理学说第18-19页
    1.3.5.1 温度第18页
    1.3.5.2 光照第18-19页
    1.3.5.3 矿质营养第19页
    1.3.5.4 水分第19页
    1.3.5.5 土壤第19页
   1.3.6 大白菜叶球发育相关基因BcpLH基因的研究现状第19-21页
    1.3.6.1 大白菜叶球发育相关基因BcpLH基因的分离及序列特征第19页
    1.3.6.2 BcpLH基因结构特征第19-20页
    1.3.6.3 BcpLH基因的表达特征第20页
    1.3.6.4 拟南芥BcpLH同源基因的序列特征第20页
    1.3.6.5 甘蓝中BcpLH基因同源基因的序列以及表达特征第20-21页
  参考文献第21-22页
 第二部分 RNA结合蛋白的结构特征及生物学功能第22-37页
  1. RNA结合蛋白的结构第22-27页
   1.1 RNA结合结构域(RNA-binding domains)第22-25页
    1.1.1 RNP花式(RNP motif)第22-23页
    1.1.2 kH花式(K homology motif)第23-24页
    1.1.3 双链RNA结合花式(Double-Stranded RNA-Binding Motif/DSRM)第24-25页
    1.1.4 精氨酸丰富的花式(The Arginine-Rich Motif/ARM)第25页
   1.2 RNA结合蛋白中的附属结构域(auxiliary domains)第25-27页
    1.2.1 富含甘氨酸的结构域第25-26页
    1.2.2 SR结构域第26页
    1.2.3 RNA结合蛋白附属结构的作用第26-27页
  2. RNA结合蛋白起转最后调节作用的机制第27-29页
   2.1 RNA的稳定和降解第27页
   2.2 RNA的翻译控制第27-28页
   2.3 RNA的编辑第28页
   2.4 RNA的贮存和定位第28-29页
  参考文献第29-37页
 第三部分 植物外源基因整合及遗传特性研究进展第37-47页
  1 转基因植物中外源DNA的整合特性第37-39页
   1.1 整合位点第37页
   1.2 整合的拷贝数第37-38页
   1.3 外源基因对植物基因组基因结构的影响第38页
   1.4 外源基因的大小及T-DNA对基因整合的影响第38-39页
  2 转基因植物中外源DNA的表达第39-41页
   2.1 外源基因的甲基化与基因失活第39页
   2.2 外源DNA整合的位置效应第39-40页
   2.3 同源基因的共抑制效应第40页
    2.3.1 正义抑制(sense suppression)第40页
    2.3.2 反义抑制(anti-sense suppression)第40页
   2.4 累加效应第40-41页
   2.5 重排效应(rearrangement)第41页
  3 转化外源基因的遗传稳定性第41-42页
  4 外源基因在转化植株中的遗传传递规律第42-44页
   4.1 符合孟德尔的遗传传递第42-43页
    4.1.1 单位点插入外源基因的遗传传递规律第42-43页
    4.1.2 多位点插入外源基因的遗传传递规律第43页
    4.1.3 纯合致死第43页
   4.2 不符合孟德尔的遗传传递第43-44页
  参考文献第44-47页
 第四部分 十字花科植物遗传转化技术第47-56页
  1 新技术在十字花科植物农杆菌转化法中的应用第47-48页
   1.1 苯基脲类细胞分裂素的应用第47页
   1.2 两步法代替了一步法第47页
   1.3 AgNO3对不定芽诱导的促进作用第47-48页
   1.4 拟菌抗生素的选择第48页
   1.5 筛选方法与筛选标记第48页
   1.6 利用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)防止褐化第48页
   1.7 利用乙酰丁香酮(AS)提高转化频率第48页
  2 利用非组培方法进行十字花科植物遗传转化的研究进展第48-53页
   2.1 真空原位抽滤法第49-50页
    2.1.1 原位真空抽滤法的转化系统第49-50页
     2.1.1.1 转化时期第49页
     2.1.1.2 转化的真空度及转化时间第49页
     2.1.1.3 转化菌液浓度第49页
     2.1.1.4 渗入培养基第49页
     2.1.1.5 转化体的筛选第49-50页
    2.1.2 原位真空抽滤法转化频率第50页
    2.1.3 转化株的拷贝数、表现及遗传第50页
    2.1.4 转化途径第50页
   2.2 蘸花法(floral dip)第50-51页
    2.2.1 转化方法第50页
    2.2.2 主要结论第50-51页
     2.2.2.1 转化时期第50页
     2.2.2.2 转化培养基第50页
     2.2.2.3 重复蘸花第50-51页
     2.2.2.4 菌液浓度第51页
     2.2.2.5 菌液的生长时期第51页
     2.2.2.6 转化后植株培养第51页
     2.2.2.7 植物生态型的影响第51页
     2.2.2.8 不同的农杆菌菌株的影响第51页
     2.2.2.9 筛选培养基第51页
     2.2.2.10 转化频率第51页
   2.3 滴涂法第51-52页
    2.3.1 转化方法第51页
    2.3.2 主要结论第51-52页
     2.3.2.1 去顶苔处理第51-52页
     2.3.2.2 筛选培养基及抗生素第52页
     2.3.2.3 环境条件第52页
     2.3.2.4 种子收获第52页
     2.3.2.5 转化效率第52页
     2.3.2.6 遗传规律第52页
   2.4 种子共培养法第52-53页
    2.4.1 种子共培养方法第52-53页
    2.4.2 技术关键以及主要结论第53页
     2.4.2.1 预培养时间第53页
     2.4.2.2 筛选方法第53页
     2.4.2.3 转化体遗传规律第53页
     2.4.2.4 分子检测结果第53页
     2.4.2.5 转化频率第53页
  参考文献第53-56页
 第五部分 选题意义及技术路线和研究目标第56-58页
  1. 选题意义第56页
  2. 技术路线第56-57页
  3. 研究目标第57-58页
正文第58-108页
 第一章 小白菜中BcpLH同源基因的分子克隆及序列分析第59-85页
  摘要第59-60页
  Abstract第60-62页
  1. 材料和方法第62-67页
   1.1 植物材料第62页
   1.2 酶、试剂和载体和菌株第62页
   1.3 DNA提取方法第62-64页
   1.4 引物的设计与合成第64页
   1.5 BcpLH同源基因的PCR扩增和PCR产物的克隆第64-65页
   1.6 感受态细胞的制备、转化及鉴定方法参照《分子克隆》第65-66页
   1.7 质粒DNA的提取第66-67页
   1.8 连接反应及酶切第67页
   1.9 电泳第67页
   1.10 Southern杂交第67页
   1.11 全序列测定与分析第67页
  2 结果与分析第67-79页
   2.1 小白菜BcpLH同源基因的扩增及序列分析第68页
   2.2 小白菜BcpLH同源cDNA序列分析第68-74页
   2.3 小白菜BccLH基因的蛋白质二级结构预测第74页
   2.4 小白菜基因组中BccLH基因拷贝数的确定第74-77页
   2.5 根据BcpLH基因同源性分析物种进化关系第77-79页
  3 结论与讨论第79-81页
   3.1 小白菜BccLH基因的序列特征及大白菜叶球发育的分子机制第79-80页
   3.2 双链RNA结合蛋白及其生物学功能第80页
   3.3 根据BcpLH同源基因的相似性分析几种作物的进化关系第80-81页
  参考文献第81-85页
 第二章 BcpLH正义基因以及反义基因对小白菜和大白菜的遗传转化第85-108页
  摘要第85-86页
  Abstract第86-88页
  1 材料与方法第88-91页
   1.1 材料第88页
    1.1.1 植物材料第88页
    1.1.2 酶、试剂、载体和菌株第88页
   1.2 实验方法第88-91页
    1.2.1 菌液培养第88页
    1.2.2 菌液稀释第88页
    1.2.3 种子低温处理和幼苗准备第88-89页
    1.2.4 转化方法第89页
     1.2.4.1 原位真空抽滤法第89页
     1.2.4.2 子房注射法第89页
     1.2.4.3 种子共培养法第89页
     1.2.4.4 花粉管通道法第89页
     1.2.4.5 蘸花法第89页
     1.2.4.6 喷花法第89页
     1.2.4.7 种子抽滤法第89页
     1.2.4.8 滴涂法第89页
    1.2.5 种子收获第89-90页
    1.2.6 转化株筛选、生根及移栽第90页
     1.2.6.1 组培法筛选第90页
     1.2.6.2 水培法筛选第90页
     1.2.6.3 浇灌法第90页
     1.2.6.4 喷苗法第90页
     1.2.6.5 浸种法第90页
     1.2.6.6 抗性苗生根第90页
     1.2.6.7 抗性苗移栽第90页
    1.2.7 质粒DNA提取方法第90页
    1.2.8 质粒DNA的酶切及连接第90页
    1.2.9 感受态细胞的制备及转化第90-91页
    1.2.10 植物DNA的提取第91页
    1.2.11 PCR扩增以及转化株检测第91页
    1.2.12 电泳第91页
  2 结果与分析第91-101页
   2.1 载体构建第91-92页
   2.2 不同的转化方法比较第92页
   2.3 抗性苗筛选方法比较第92-95页
    2.3.1 抗生素浓度筛选第92-94页
    2.3.2 不同筛选方法的比较第94-95页
   2.4 抗性苗生根培养基的筛选第95页
   2.5 抗性苗生长表现第95-96页
   2.6 抗性苗分子检测第96-97页
   2.7 原位真空抽滤法转化系统研究第97-101页
    2.7.1 不同的转化时期对转化效果的影响第97页
    2.7.2 低温及播种时期对大白菜及小白菜抽薹及苗态建成的影响第97-99页
    2.7.3 抽滤时间对转化效果的影响第99-100页
    2.7.4 菌液浓度对转化效果的影响第100页
    2.7.5 表面活性剂以及蔗糖浓度对真空抽滤转化效果的影响第100-101页
    2.7.6 其它因素对转化频率的影响第101页
  3 讨论第101-104页
   3.1 对大白菜和小白菜不同转化方法的评价第102页
   3.2 原位真空抽滤转基因中转化体筛选方法第102-103页
   3.3 外源基因整合进植物基因组后的遗传效应第103-104页
  4 结论第104-105页
  参考文献第105-108页
附图第108-114页
作者简介第114页

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