中文摘要 | 第1-12页 |
英文摘要 | 第12-15页 |
综述 | 第15-58页 |
第一部分 叶球发育机理 | 第16-22页 |
1.1 植物的器官分化和器官异态 | 第16页 |
1.2 大白菜的进化过程及叶球发育 | 第16-17页 |
1.3 大白菜叶球形成的机理 | 第17-21页 |
1.3.1 形态学机理 | 第17页 |
1.3.2 分化起源学说 | 第17页 |
1.3.3 杂交起源学说 | 第17-18页 |
1.3.4 生理机制 | 第18页 |
1.3.5 生态生理学说 | 第18-19页 |
1.3.5.1 温度 | 第18页 |
1.3.5.2 光照 | 第18-19页 |
1.3.5.3 矿质营养 | 第19页 |
1.3.5.4 水分 | 第19页 |
1.3.5.5 土壤 | 第19页 |
1.3.6 大白菜叶球发育相关基因BcpLH基因的研究现状 | 第19-21页 |
1.3.6.1 大白菜叶球发育相关基因BcpLH基因的分离及序列特征 | 第19页 |
1.3.6.2 BcpLH基因结构特征 | 第19-20页 |
1.3.6.3 BcpLH基因的表达特征 | 第20页 |
1.3.6.4 拟南芥BcpLH同源基因的序列特征 | 第20页 |
1.3.6.5 甘蓝中BcpLH基因同源基因的序列以及表达特征 | 第20-21页 |
参考文献 | 第21-22页 |
第二部分 RNA结合蛋白的结构特征及生物学功能 | 第22-37页 |
1. RNA结合蛋白的结构 | 第22-27页 |
1.1 RNA结合结构域(RNA-binding domains) | 第22-25页 |
1.1.1 RNP花式(RNP motif) | 第22-23页 |
1.1.2 kH花式(K homology motif) | 第23-24页 |
1.1.3 双链RNA结合花式(Double-Stranded RNA-Binding Motif/DSRM) | 第24-25页 |
1.1.4 精氨酸丰富的花式(The Arginine-Rich Motif/ARM) | 第25页 |
1.2 RNA结合蛋白中的附属结构域(auxiliary domains) | 第25-27页 |
1.2.1 富含甘氨酸的结构域 | 第25-26页 |
1.2.2 SR结构域 | 第26页 |
1.2.3 RNA结合蛋白附属结构的作用 | 第26-27页 |
2. RNA结合蛋白起转最后调节作用的机制 | 第27-29页 |
2.1 RNA的稳定和降解 | 第27页 |
2.2 RNA的翻译控制 | 第27-28页 |
2.3 RNA的编辑 | 第28页 |
2.4 RNA的贮存和定位 | 第28-29页 |
参考文献 | 第29-37页 |
第三部分 植物外源基因整合及遗传特性研究进展 | 第37-47页 |
1 转基因植物中外源DNA的整合特性 | 第37-39页 |
1.1 整合位点 | 第37页 |
1.2 整合的拷贝数 | 第37-38页 |
1.3 外源基因对植物基因组基因结构的影响 | 第38页 |
1.4 外源基因的大小及T-DNA对基因整合的影响 | 第38-39页 |
2 转基因植物中外源DNA的表达 | 第39-41页 |
2.1 外源基因的甲基化与基因失活 | 第39页 |
2.2 外源DNA整合的位置效应 | 第39-40页 |
2.3 同源基因的共抑制效应 | 第40页 |
2.3.1 正义抑制(sense suppression) | 第40页 |
2.3.2 反义抑制(anti-sense suppression) | 第40页 |
2.4 累加效应 | 第40-41页 |
2.5 重排效应(rearrangement) | 第41页 |
3 转化外源基因的遗传稳定性 | 第41-42页 |
4 外源基因在转化植株中的遗传传递规律 | 第42-44页 |
4.1 符合孟德尔的遗传传递 | 第42-43页 |
4.1.1 单位点插入外源基因的遗传传递规律 | 第42-43页 |
4.1.2 多位点插入外源基因的遗传传递规律 | 第43页 |
4.1.3 纯合致死 | 第43页 |
4.2 不符合孟德尔的遗传传递 | 第43-44页 |
参考文献 | 第44-47页 |
第四部分 十字花科植物遗传转化技术 | 第47-56页 |
1 新技术在十字花科植物农杆菌转化法中的应用 | 第47-48页 |
1.1 苯基脲类细胞分裂素的应用 | 第47页 |
1.2 两步法代替了一步法 | 第47页 |
1.3 AgNO3对不定芽诱导的促进作用 | 第47-48页 |
1.4 拟菌抗生素的选择 | 第48页 |
1.5 筛选方法与筛选标记 | 第48页 |
1.6 利用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)防止褐化 | 第48页 |
1.7 利用乙酰丁香酮(AS)提高转化频率 | 第48页 |
2 利用非组培方法进行十字花科植物遗传转化的研究进展 | 第48-53页 |
2.1 真空原位抽滤法 | 第49-50页 |
2.1.1 原位真空抽滤法的转化系统 | 第49-50页 |
2.1.1.1 转化时期 | 第49页 |
2.1.1.2 转化的真空度及转化时间 | 第49页 |
2.1.1.3 转化菌液浓度 | 第49页 |
2.1.1.4 渗入培养基 | 第49页 |
2.1.1.5 转化体的筛选 | 第49-50页 |
2.1.2 原位真空抽滤法转化频率 | 第50页 |
2.1.3 转化株的拷贝数、表现及遗传 | 第50页 |
2.1.4 转化途径 | 第50页 |
2.2 蘸花法(floral dip) | 第50-51页 |
2.2.1 转化方法 | 第50页 |
2.2.2 主要结论 | 第50-51页 |
2.2.2.1 转化时期 | 第50页 |
2.2.2.2 转化培养基 | 第50页 |
2.2.2.3 重复蘸花 | 第50-51页 |
2.2.2.4 菌液浓度 | 第51页 |
2.2.2.5 菌液的生长时期 | 第51页 |
2.2.2.6 转化后植株培养 | 第51页 |
2.2.2.7 植物生态型的影响 | 第51页 |
2.2.2.8 不同的农杆菌菌株的影响 | 第51页 |
2.2.2.9 筛选培养基 | 第51页 |
2.2.2.10 转化频率 | 第51页 |
2.3 滴涂法 | 第51-52页 |
2.3.1 转化方法 | 第51页 |
2.3.2 主要结论 | 第51-52页 |
2.3.2.1 去顶苔处理 | 第51-52页 |
2.3.2.2 筛选培养基及抗生素 | 第52页 |
2.3.2.3 环境条件 | 第52页 |
2.3.2.4 种子收获 | 第52页 |
2.3.2.5 转化效率 | 第52页 |
2.3.2.6 遗传规律 | 第52页 |
2.4 种子共培养法 | 第52-53页 |
2.4.1 种子共培养方法 | 第52-53页 |
2.4.2 技术关键以及主要结论 | 第53页 |
2.4.2.1 预培养时间 | 第53页 |
2.4.2.2 筛选方法 | 第53页 |
2.4.2.3 转化体遗传规律 | 第53页 |
2.4.2.4 分子检测结果 | 第53页 |
2.4.2.5 转化频率 | 第53页 |
参考文献 | 第53-56页 |
第五部分 选题意义及技术路线和研究目标 | 第56-58页 |
1. 选题意义 | 第56页 |
2. 技术路线 | 第56-57页 |
3. 研究目标 | 第57-58页 |
正文 | 第58-108页 |
第一章 小白菜中BcpLH同源基因的分子克隆及序列分析 | 第59-85页 |
摘要 | 第59-60页 |
Abstract | 第60-62页 |
1. 材料和方法 | 第62-67页 |
1.1 植物材料 | 第62页 |
1.2 酶、试剂和载体和菌株 | 第62页 |
1.3 DNA提取方法 | 第62-64页 |
1.4 引物的设计与合成 | 第64页 |
1.5 BcpLH同源基因的PCR扩增和PCR产物的克隆 | 第64-65页 |
1.6 感受态细胞的制备、转化及鉴定方法参照《分子克隆》 | 第65-66页 |
1.7 质粒DNA的提取 | 第66-67页 |
1.8 连接反应及酶切 | 第67页 |
1.9 电泳 | 第67页 |
1.10 Southern杂交 | 第67页 |
1.11 全序列测定与分析 | 第67页 |
2 结果与分析 | 第67-79页 |
2.1 小白菜BcpLH同源基因的扩增及序列分析 | 第68页 |
2.2 小白菜BcpLH同源cDNA序列分析 | 第68-74页 |
2.3 小白菜BccLH基因的蛋白质二级结构预测 | 第74页 |
2.4 小白菜基因组中BccLH基因拷贝数的确定 | 第74-77页 |
2.5 根据BcpLH基因同源性分析物种进化关系 | 第77-79页 |
3 结论与讨论 | 第79-81页 |
3.1 小白菜BccLH基因的序列特征及大白菜叶球发育的分子机制 | 第79-80页 |
3.2 双链RNA结合蛋白及其生物学功能 | 第80页 |
3.3 根据BcpLH同源基因的相似性分析几种作物的进化关系 | 第80-81页 |
参考文献 | 第81-85页 |
第二章 BcpLH正义基因以及反义基因对小白菜和大白菜的遗传转化 | 第85-108页 |
摘要 | 第85-86页 |
Abstract | 第86-88页 |
1 材料与方法 | 第88-91页 |
1.1 材料 | 第88页 |
1.1.1 植物材料 | 第88页 |
1.1.2 酶、试剂、载体和菌株 | 第88页 |
1.2 实验方法 | 第88-91页 |
1.2.1 菌液培养 | 第88页 |
1.2.2 菌液稀释 | 第88页 |
1.2.3 种子低温处理和幼苗准备 | 第88-89页 |
1.2.4 转化方法 | 第89页 |
1.2.4.1 原位真空抽滤法 | 第89页 |
1.2.4.2 子房注射法 | 第89页 |
1.2.4.3 种子共培养法 | 第89页 |
1.2.4.4 花粉管通道法 | 第89页 |
1.2.4.5 蘸花法 | 第89页 |
1.2.4.6 喷花法 | 第89页 |
1.2.4.7 种子抽滤法 | 第89页 |
1.2.4.8 滴涂法 | 第89页 |
1.2.5 种子收获 | 第89-90页 |
1.2.6 转化株筛选、生根及移栽 | 第90页 |
1.2.6.1 组培法筛选 | 第90页 |
1.2.6.2 水培法筛选 | 第90页 |
1.2.6.3 浇灌法 | 第90页 |
1.2.6.4 喷苗法 | 第90页 |
1.2.6.5 浸种法 | 第90页 |
1.2.6.6 抗性苗生根 | 第90页 |
1.2.6.7 抗性苗移栽 | 第90页 |
1.2.7 质粒DNA提取方法 | 第90页 |
1.2.8 质粒DNA的酶切及连接 | 第90页 |
1.2.9 感受态细胞的制备及转化 | 第90-91页 |
1.2.10 植物DNA的提取 | 第91页 |
1.2.11 PCR扩增以及转化株检测 | 第91页 |
1.2.12 电泳 | 第91页 |
2 结果与分析 | 第91-101页 |
2.1 载体构建 | 第91-92页 |
2.2 不同的转化方法比较 | 第92页 |
2.3 抗性苗筛选方法比较 | 第92-95页 |
2.3.1 抗生素浓度筛选 | 第92-94页 |
2.3.2 不同筛选方法的比较 | 第94-95页 |
2.4 抗性苗生根培养基的筛选 | 第95页 |
2.5 抗性苗生长表现 | 第95-96页 |
2.6 抗性苗分子检测 | 第96-97页 |
2.7 原位真空抽滤法转化系统研究 | 第97-101页 |
2.7.1 不同的转化时期对转化效果的影响 | 第97页 |
2.7.2 低温及播种时期对大白菜及小白菜抽薹及苗态建成的影响 | 第97-99页 |
2.7.3 抽滤时间对转化效果的影响 | 第99-100页 |
2.7.4 菌液浓度对转化效果的影响 | 第100页 |
2.7.5 表面活性剂以及蔗糖浓度对真空抽滤转化效果的影响 | 第100-101页 |
2.7.6 其它因素对转化频率的影响 | 第101页 |
3 讨论 | 第101-104页 |
3.1 对大白菜和小白菜不同转化方法的评价 | 第102页 |
3.2 原位真空抽滤转基因中转化体筛选方法 | 第102-103页 |
3.3 外源基因整合进植物基因组后的遗传效应 | 第103-104页 |
4 结论 | 第104-105页 |
参考文献 | 第105-108页 |
附图 | 第108-114页 |
作者简介 | 第114页 |