| 缩略词表 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-14页 |
| 英文摘要 | 第14-17页 |
| 前言 | 第17-19页 |
| 实验材料 | 第19-21页 |
| 1 实验动物 | 第19页 |
| 2 实验药品与试剂 | 第19-20页 |
| 3 主要仪器及设备 | 第20-21页 |
| 实验方法 | 第21-33页 |
| 1 小鼠脑室埋管及药物引入 | 第21页 |
| 2 小鼠吗啡耐受依赖动物模型的建立 | 第21-22页 |
| ·吗啡的给药方式 | 第21页 |
| ·光辐射热甩尾潜伏期测定(TFL) | 第21页 |
| ·纳洛酮诱发戒断症状的观察 | 第21-22页 |
| 3 人成神经瘤细胞SH-SY5Y吗啡依赖样模型的建立 | 第22页 |
| ·SH-SY5Y细胞培养及分化 | 第22页 |
| ·吗啡作用不同时间及纳洛酮激发后cAMP水平的测定 | 第22页 |
| 4 吗啡耐受依赖小鼠脑组织及SH-SY5Y细胞cAMP含量测定 | 第22-23页 |
| ·cAMP提取 | 第22-23页 |
| ·cAMP含量测定 | 第23页 |
| ·cAMP含量计算 | 第23页 |
| 5 吗啡耐受依赖小鼠脑组织AC活性的测定 | 第23-24页 |
| ·AC提取 | 第23-24页 |
| ·AC活性测定 | 第24页 |
| 6 吗啡耐受依赖小鼠脑组织cGMP含量测定 | 第24-25页 |
| ·cGMP提取 | 第24页 |
| ·cGMP含量测定 | 第24-25页 |
| ·cGMP含量计算 | 第25页 |
| 7 吗啡耐受依赖小鼠脑组织sGC活性测定 | 第25页 |
| ·sGC提取 | 第25页 |
| ·sGC活性测定 | 第25页 |
| 8 吗啡耐受依赖小鼠脑组织PDE活性测定 | 第25-26页 |
| ·PDE样品制备 | 第25-26页 |
| ·PDE活性测定 | 第26页 |
| 9 吗啡耐受依赖小鼠脑组织cNOS和iNOS活性测定 | 第26-27页 |
| ·NOS样品制备 | 第26-27页 |
| ·NOS活性测定 | 第27页 |
| ·NOS活性计算 | 第27页 |
| 10 吗啡耐受依赖小鼠脑组织磷酸肌醇含量测定 | 第27-28页 |
| ·脑组织~3H-肌醇的掺入及磷酸肌醇(IP、IP_2、IP_3)含量测定 | 第27-28页 |
| ·磷酸肌醇含量计算 | 第28页 |
| 11 吗啡耐受依赖小鼠脑组织及SH-SY5Y细胞PKA活性测定 | 第28-29页 |
| ·PKA样品制备 | 第28-29页 |
| ·PKA活性测定 | 第29页 |
| ·PKA活性计算 | 第29页 |
| 12 吗啡耐受依赖小鼠脑组织及SH-SY5Y细胞PKC活性测定 | 第29-30页 |
| ·PKC样品制备 | 第29页 |
| ·PKC活性测定 | 第29页 |
| ·PKC活性计算 | 第29-30页 |
| 13 吗啡耐受依赖小鼠脑组织AC、sGC、PDE、NOS反磷酸化测定 | 第30页 |
| ·磷酸化反应 | 第30页 |
| ·SDS-PAGE及放射自显影分析 | 第30页 |
| 14 吗啡依赖样SH-SY5Y细胞c-Fos磷酸化测定 | 第30-32页 |
| ·细胞c-Fos ~(32)P放射性标记 | 第30-31页 |
| ·细胞裂解 | 第31页 |
| ·抗原-抗体复合物形成 | 第31页 |
| ·靶蛋白c-Fos的免疫沉淀 | 第31-32页 |
| ·免疫沉淀物中放射性标记蛋白SDS-PAGE及放射自显影分析 | 第32页 |
| 15 蛋白质浓度测定 | 第32页 |
| 16 数据处理 | 第32-33页 |
| 实验结果 | 第33-59页 |
| 1 小鼠吗啡耐受依赖模型的建立 | 第33-35页 |
| ·小鼠对吗啡镇痛效应的耐受 | 第33页 |
| ·小鼠形成吗啡依赖过程中体重的变化及纳洛酮诱发吗啡依赖小鼠的戒断反应 | 第33-35页 |
| 2 吗啡耐受依赖小鼠脑组织cAMP、cGMP、磷酸肌醇(IP、IP_2、IP_3)含量的变化 | 第35-38页 |
| ·cAMP含量变化 | 第35页 |
| ·cGMP含量变化及NOS抑制剂对其影响 | 第35页 |
| ·磷酸肌醇含量变化 | 第35-38页 |
| 3 吗啡耐受依赖小鼠脑组织PKA及PKC活性变化及PKA、PKC抑制剂对小鼠吗啡耐受依赖形成的影响 | 第38-42页 |
| 4 i.c.v.PKA及PKC抑制剂、NOS抑制剂脑组织病理形态学检查 | 第42页 |
| 5 PKA、PKC对吗啡耐受依赖小鼠脑组织AC活性的磷酸化调节 | 第42-46页 |
| ·吗啡耐受依赖小鼠脑组织AC活性的变化及PKA、PKC抑制剂对其影响 | 第42页 |
| ·PKA对AC的磷酸化作用 | 第42-46页 |
| 6 PKA、PKC对吗啡耐受依赖小鼠脑组织sGC活性的磷酸化调节 | 第46-48页 |
| ·吗啡耐受依赖小鼠脑组织sGC活性的变化及PKA、PKC抑制剂对其影响 | 第46页 |
| ·PKA对sGC的磷酸化作用 | 第46-48页 |
| 7 PKA、PKC对吗啡耐受依赖小鼠脑组织NOS活性的磷酸化调节 | 第48页 |
| ·吗啡耐受依赖小鼠脑组织NOS活性的变化及PKA、PKC抑制剂对其影响 | 第48页 |
| ·PKA对NOS的磷酸化作用 | 第48页 |
| 8 PKA、PKC对吗啡耐受依赖小鼠脑组织PDE活性的磷酸化调节 | 第48-53页 |
| ·吗啡耐受依赖小鼠脑组织PDE活性的变化及PKA、PKC抑制剂对其影响 | 第48页 |
| ·PKA对PDE的磷酸化作用 | 第48-53页 |
| 9 吗啡依赖样SH-SY5Y细胞模型的建立及纳洛酮诱发的类阿片戒断现象 | 第53页 |
| 10 SH-SY5Y细胞形成阿片依赖样过程中PKA、PKC活性变化 | 第53-57页 |
| 11 PKA、PKC对吗啡依赖样SH-SY5Y细胞c-Fos磷酸化的调节 | 第57-59页 |
| 讨论 | 第59-74页 |
| 1 吗啡耐受依赖的实验模型 | 第59-60页 |
| 2 阿片受体耦联的第二信使系统的适应性变化与吗啡耐受依赖 | 第60-66页 |
| 3 胞内信使调节的蛋白激酶PKA及PKC与吗啡耐受依赖 | 第66-68页 |
| 4 吗啡耐受依赖的蛋白磷酸化机制 | 第68-70页 |
| 5 以蛋白磷酸化为中心的多种信号系统的相互作用与吗啡耐受依赖 | 第70-74页 |
| 结论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-86页 |
| 文献综述 蛋白磷酸化与信号转导机制 | 第86-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
