| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 综述 | 第11-23页 |
| 1 microRNA | 第11-15页 |
| ·miRNA 的发现 | 第11页 |
| ·miRNA 的命名 | 第11-12页 |
| ·miRNA 的产生 | 第12页 |
| ·miRNA 的作用机制 | 第12-13页 |
| ·miRNA 与疾病的关系 | 第13-15页 |
| 2 肝细胞癌 | 第15-16页 |
| 3 β连环蛋白（β-CATENIN） | 第16-19页 |
| ·β-catenin 参与细胞骨架构建 | 第16页 |
| ·β-catenin 参与 Wnt/β-catenin 途径 | 第16-18页 |
| ·β-catenin 参与 c-Met-β-catenin 途径 | 第18页 |
| ·β-catenin 调控 P450 酶系 | 第18-19页 |
| 4 黄曲霉毒素 | 第19-23页 |
| ·黄曲霉毒素的发现 | 第19页 |
| ·黄曲霉毒素的分布 | 第19-20页 |
| ·黄曲霉毒素 B1 的性质 | 第20页 |
| ·黄曲霉毒素 B1 的致癌性 | 第20-23页 |
| 第二章 黄曲霉毒素对β-catenin 表达水平的影响 | 第23-31页 |
| 1 引言 | 第23页 |
| 2 材料 | 第23-24页 |
| ·细胞株 | 第23页 |
| ·试剂与耗材 | 第23页 |
| ·仪器 | 第23-24页 |
| 3 实验方法 | 第24-26页 |
| ·复苏细胞 | 第24页 |
| ·向细胞中加入 AFB1 | 第24页 |
| ·MTT assay 测定细胞半致死剂量 | 第24-25页 |
| ·细胞蛋白的提取与浓度测定 | 第25页 |
| ·Western blot 检测β-catenin 表达水平 | 第25-26页 |
| 4 结果 | 第26-29页 |
| 5 讨论 | 第29-30页 |
| 6 小结 | 第30-31页 |
| 第三章 预测靶中β-catenin 的目标 miRNA | 第31-37页 |
| 1 引言 | 第31页 |
| 2 材料 | 第31页 |
| 3 实验方法 | 第31页 |
| 4 结果 | 第31-35页 |
| 5 讨论 | 第35-36页 |
| 6 小结 | 第36-37页 |
| 第四章 研究涉及的相关载体的构建 | 第37-54页 |
| 1 引言 | 第37页 |
| 2 材料 | 第37-39页 |
| ·菌株与质粒 | 第37页 |
| ·试剂与耗材 | 第37-38页 |
| ·仪器 | 第38页 |
| ·引物及序列 | 第38-39页 |
| 3 实验方法 | 第39-45页 |
| ·细胞基因组的提取 | 第39页 |
| ·构建 miRNA 表达载体 | 第39-44页 |
| ·细胞总 RNA 的提取 | 第44页 |
| ·反转录 | 第44-45页 |
| ·构建 pEGFP-N1-β-catenin 载体 | 第45页 |
| 4 结果 | 第45-52页 |
| ·提取细胞基因组 | 第45-46页 |
| ·构建 hsa-miRNA 的过表达载体 | 第46-50页 |
| ·提取总 RNA | 第50-51页 |
| ·构建 pEGFP-N1-β-catenin 载体 | 第51-52页 |
| 5 讨论 | 第52-53页 |
| 6 小结 | 第53-54页 |
| 第五章 验证靶中β-catenin 的 miRNA | 第54-75页 |
| 1 引言 | 第54页 |
| 2 材料 | 第54-55页 |
| ·菌株与质粒 | 第54页 |
| ·试剂与耗材 | 第54页 |
| ·仪器 | 第54-55页 |
| 3 实验方法 | 第55-56页 |
| ·提取转染质粒 | 第55页 |
| ·转染并测定转染效率 | 第55页 |
| ·过表达 miRNA | 第55页 |
| ·Western blot 检测β-catenin 表达水平 | 第55页 |
| ·Colony formation assay | 第55-56页 |
| ·MTT assay | 第56页 |
| 4 结果 | 第56-71页 |
| ·测定待转染质粒浓度 | 第56页 |
| ·计算转染效率 | 第56-57页 |
| ·Western blot 检测细胞β-catenin 的表达水平 | 第57-58页 |
| ·Western blot 验证可能靶中β-catenin 的 miRNA | 第58-60页 |
| ·Western blot 检测 hsa-miR-33a*的作用 | 第60-61页 |
| ·Western blot 检测 hsa-miR-33a inhibitor 的抑制效果 | 第61-62页 |
| ·Colony formation assay 检测 miRNA 对细胞克隆形成能力的影响 | 第62-65页 |
| ·MTT 检测 miRNA 对细胞活力的影响 | 第65-67页 |
| ·检测β-catenin 的 siRNA 对 hsa-miR-33a 的叠加效应 | 第67-70页 |
| ·Transwell assay 检测 hsa-miR-33a 对细胞迁移与入侵能力影响 | 第70-71页 |
| 5 讨论 | 第71-74页 |
| 6 小结 | 第74-75页 |
| 结论与展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 附录 | 第88-90页 |
