重组人胰高糖素样肽-1突变体的串联体与人血清白蛋白融合蛋白的纯化及纯度鉴定
| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-20页 |
| ·研究背景 | 第8-9页 |
| ·胰高糖素样肽-1 及其对糖尿病的治疗 | 第9-11页 |
| ·GLP-1 的发现 | 第9页 |
| ·GLP-1 的活性及对糖尿病的作用 | 第9-11页 |
| ·重组蛋白融合技术与人血清白蛋白 | 第11-13页 |
| ·长效重组蛋白研究背景 | 第11页 |
| ·长效制剂 | 第11页 |
| ·构建突变体 | 第11-12页 |
| ·基因融合 | 第12页 |
| ·人血清白蛋白的特性 | 第12-13页 |
| ·蛋白质特性与分离纯化技术的选择 | 第13-16页 |
| ·分子大小与形状 | 第14页 |
| ·分配系数与溶解度 | 第14-16页 |
| ·重组白蛋白的纯化 | 第16-18页 |
| ·本课题研究的内容和意义 | 第18-20页 |
| ·本课题研究的基础 | 第18-19页 |
| ·本课题研究的内容 | 第19页 |
| ·本课题研究的意义 | 第19-20页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第20-31页 |
| ·菌种、细胞和KM 小鼠 | 第20页 |
| ·试剂 | 第20-21页 |
| ·培养基 | 第20页 |
| ·层析介质 | 第20页 |
| ·蛋白浓度测定试剂 | 第20页 |
| ·蛋白质电泳试剂 | 第20-21页 |
| ·其他试剂 | 第21页 |
| ·仪器 | 第21-22页 |
| ·菌体发酵及发酵条件优化仪器 | 第21页 |
| ·蛋白质纯化与纯度鉴定仪器 | 第21-22页 |
| ·活性鉴定仪器 | 第22页 |
| ·其他常用仪器 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-31页 |
| ·融合蛋白的表达 | 第22-23页 |
| ·发酵条件的初步优化 | 第23-24页 |
| ·超滤浓缩 | 第24-25页 |
| ·盐析 | 第25页 |
| ·大孔树脂脱色 | 第25-26页 |
| ·离子交换层析 | 第26页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第26页 |
| ·蛋白质纯度测定方法 | 第26-28页 |
| ·蛋白质含量测定方法 | 第28-29页 |
| ·融合蛋白的western blot 鉴定 | 第29页 |
| ·融合蛋白等电点的测定 | 第29页 |
| ·融合蛋白的体外活性实验 | 第29-31页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第31-43页 |
| ·发酵条件的优化 | 第31-32页 |
| ·诱导剂甲醇量的优化 | 第31页 |
| ·诱导培养基pH 的优化 | 第31-32页 |
| ·诱导时间的优化 | 第32页 |
| ·发酵条件优化总结 | 第32页 |
| ·融合蛋白分离纯化 | 第32-37页 |
| ·融合蛋白的超滤浓缩 | 第32-33页 |
| ·融合蛋白的盐析 | 第33-34页 |
| ·融合蛋白的大孔树脂脱色 | 第34-35页 |
| ·融合蛋白的离子交换 | 第35-36页 |
| ·融合蛋白的凝胶层析 | 第36-37页 |
| ·融合蛋白的纯化过程总结 | 第37页 |
| ·融合蛋白的western blot 鉴定 | 第37-38页 |
| ·融合蛋白等电点的测定 | 第38页 |
| ·融合蛋白的纯度鉴定 | 第38-41页 |
| ·SDS-PAGE 纯度鉴定 | 第38-39页 |
| ·HPLC 纯度鉴定 | 第39-40页 |
| ·放射性化学纯度鉴定 | 第40-41页 |
| ·融合蛋白的体外活性实验 | 第41-42页 |
| ·本章结论 | 第42-43页 |
| 论文总结及展望 | 第43-45页 |
| 一、主要结论 | 第43页 |
| 二、存在问题及展望 | 第43-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第50页 |
