| 第一部分 EB病毒相关胃癌组织中病毒基因表达的研究 | 第1-39页 |
| 中文摘要 | 第5-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 第一章 材料与方法 | 第10-18页 |
| ·仪器、试剂和耗材 | 第10-11页 |
| ·主要仪器 | 第10页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第10-11页 |
| ·研究对象 | 第11页 |
| ·核酸提取 | 第11-12页 |
| ·单细胞悬液的制备 | 第11页 |
| ·组织细胞DNA提取 | 第11-12页 |
| ·组织总RNA提取 | 第12页 |
| ·PCR-Southern杂交检测EBV基因组 | 第12-13页 |
| ·原位杂交检测EBV EBER1的表达 | 第13-14页 |
| ·EBV核抗原家族基因启动子、潜伏期基因、裂解期基因的RT-PCR检测 | 第14-17页 |
| ·引物和探针的设计合成 | 第14-15页 |
| ·寡核苷酸探针标记 | 第15-16页 |
| ·cDNA合成 | 第16页 |
| ·PCR扩增 | 第16页 |
| ·PCR产物转膜 | 第16-17页 |
| ·Southern blotting | 第17页 |
| ·实验结果的统计学分析 | 第17-18页 |
| 第二章 结果 | 第18-25页 |
| ·胃癌组织和相应癌旁组织中EBV基因组及EBER1的检测 | 第18-21页 |
| ·EBV感染与病人临床病理特征的关系 | 第21页 |
| ·EBVaGC组织中病毒基因表达的RT-PCR分析结果 | 第21-25页 |
| ·EBV核抗原家族基因启动子的表达 | 第21页 |
| ·EBV潜伏期基因的表达 | 第21页 |
| ·EBV裂解期基因的表达 | 第21-25页 |
| 第三章 讨论 | 第25-31页 |
| ·EBV感染与胃癌的关系 | 第25-26页 |
| ·EBV潜伏期基因的表达 | 第26-28页 |
| ·EBV裂解期基因的表达 | 第28-31页 |
| 附表 | 第31-36页 |
| 参考文献 | 第36-39页 |
| 第二部分:EB病毒对人胃癌细胞系HSC-39感染的研究 | 第39-72页 |
| 中文摘要 | 第39-40页 |
| 英文摘要 | 第40-42页 |
| 引言 | 第42页 |
| 第一章 材料和方法 | 第42-54页 |
| ·仪器、试剂和耗材 | 第42-44页 |
| ·主要仪器 | 第42-43页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第43-44页 |
| ·细胞 | 第44页 |
| ·靶细胞的感染 | 第44-45页 |
| ·无细胞病毒株的制备 | 第44页 |
| ·病毒接种 | 第44-45页 |
| ·免疫荧光检测 | 第45页 |
| ·抗补体免疫荧光法检测EBV核抗原(EBNA) | 第45页 |
| ·间接免疫荧光法检测EBV早期抗原EA-D | 第45页 |
| ·原位杂交检测EBV编码小RNA1(EBER1) | 第45-47页 |
| ·地高辛标记探针 | 第46页 |
| ·原位杂交 | 第46-47页 |
| ·PCR-Southern检测EBV DNA | 第47-49页 |
| ·感染细胞DNA的提取 | 第47页 |
| ·EBV基因组特异性引物合成 | 第47页 |
| ·EBVBamH Ⅰ-片段的PCR扩增 | 第47-48页 |
| ·PCR产物转膜 | 第48页 |
| ·Southern blotting | 第48-49页 |
| ·MTT法检测细胞增生 | 第49页 |
| ·软琼脂培养检测细胞克隆形成率 | 第49页 |
| ·Western blotting检测EBV编码蛋白表达 | 第49-51页 |
| ·蛋白质的提取 | 第49-50页 |
| ·Western blotting检测EBV编码蛋白的表达 | 第50-51页 |
| ·RT-PCR分析 | 第51-53页 |
| ·HSC-39细胞及感染细胞克隆中CD21的检测 | 第53-54页 |
| ·流式细胞技术(FACS)分析HSC-39细胞CD21受体的表达 | 第53页 |
| ·RT-PCR检测HSC-39细胞及感染细胞克隆中CD21mRNA | 第53-54页 |
| 第二章 结果 | 第54-64页 |
| ·EBV对HSC-39细胞的感染 | 第54-58页 |
| ·Akata和P3HR-1 EBV感染对HSC-39形态及生长的影响 | 第58页 |
| ·Akata和P3HR-1感染细胞中EBV基因的表达 | 第58-62页 |
| ·HSC-39细胞及感染细胞克隆中CD21受体的表达 | 第62-64页 |
| 第三章 讨论 | 第64-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 第三部分 LMPI沉默对AP-1信号转导通路的影响 | 第72-91页 |
| 中文摘要 | 第72-73页 |
| 英文摘要 | 第73-74页 |
| 引言 | 第74页 |
| 第一章 材料和方法 | 第74-79页 |
| ·仪器、试剂和耗材 | 第74-76页 |
| ·siRNA的转染 | 第76页 |
| ·RNAi效应的检测 | 第76-78页 |
| ·半定量RT-PCR检测C-jun,survivin,CDK4和MMP9mRNA转录表达 | 第78页 |
| ·Western Blotting检测c-jun,junB和CDK4的表达 | 第78-79页 |
| ·免疫组化检测survivin表达 | 第79页 |
| ·统计学分析 | 第79页 |
| 第二章 结果 | 第79-83页 |
| ·siRNA作用对LMP1蛋白表达的影响 | 第79页 |
| ·Hochest33258染色观察细胞凋亡 | 第79-80页 |
| ·透射电镜观察细胞超微结构的变化 | 第80-81页 |
| ·LMP1沉默对C-Jun,CDK4,survivin和MMP9mRNA表达的影响 | 第81-82页 |
| ·Western Blotting检测siRNA作用对c-jun,junB和CDK4蛋白表达的影响水平 | 第82页 |
| ·细胞免疫组化检测siRNA作用后survivin表达水平 | 第82-83页 |
| 第三章 讨论 | 第83-87页 |
| 第四章 结论 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-91页 |
| 综述 | 第91-111页 |
| 研究成果 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
