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阪崎克罗诺杆菌LPS结构基因waaC的鉴定及其对菌膜形成影响研究

摘要第1-4页
Abstract第4-5页
目录第5-7页
第一章 引言第7-16页
   ·阪崎克罗诺杆菌的研究进展第7-9页
     ·阪崎克罗诺杆菌的系谱及生理生化性质第7页
     ·阪崎克罗诺杆菌的污染与致病性第7-8页
     ·阪崎克罗诺杆菌的分离与检测第8-9页
   ·菌膜第9-11页
     ·菌膜的概念、形成过程及危害第9-10页
     ·影响菌膜形成的因素第10-11页
   ·脂多糖第11-14页
     ·脂多糖的组成及其生物合成途径第11页
     ·脂多糖的功能第11-14页
   ·立题背景与意义第14页
   ·课题研究内容和研究目标第14-16页
第二章 实验材料与方法第16-26页
   ·实验材料第16-18页
     ·菌株、质粒及引物第16页
     ·培养基第16-17页
     ·试剂、试剂盒与工具酶第17页
     ·主要仪器第17-18页
   ·构建LPS 结构突变株LWW02第18-20页
     ·质粒及基因组的提取第18页
     ·PCR 体系及反应条件第18页
     ·酶切、连接反应条件第18页
     ·阪崎克罗诺杆菌LPS 生物合成相关基因ESA_04107 的敲除第18-20页
     ·阪崎克罗诺杆菌LPS 生物合成相关基因ESA_04107 的回补第20页
   ·LPS 结构突变株LWW02 的验证第20-22页
     ·LPS 的提取及SDS-PAGE 分析第20-21页
     ·Kd0_2-lipid A 的提取纯化及TLC、ESI/MS 分析第21-22页
   ·RT-PCR 考察waaC 基因敲除后ESA_04108 基因的表达水平差异第22页
   ·分析LPS 结构突变株LWW02 的细胞生长速率、细胞形态变化第22-23页
     ·生长速率的测定第22-23页
     ·TEM 观察细胞形态第23页
   ·分析LPS 结构突变株LWW02 的菌膜形成能力第23-26页
     ·测定亲疏水介质表面的菌膜形成能力第23页
     ·测定细胞表面疏水性第23-24页
     ·测定细胞外膜通透性第24页
     ·自凝集能力测定第24页
     ·蒽酮比色法测定胞外多糖含量第24-25页
     ·测定黄色素分泌量第25页
     ·运动性分析第25-26页
第三章 结果与讨论第26-42页
   ·阪崎克罗诺杆菌的庚糖基转移酶I 编码基因的鉴定第26-30页
     ·LPS 结构突变株LWW02 的构建第26页
     ·LPS 结构突变株LWW02 的基因水平验证第26-27页
     ·突变株LWW02 的LPS 结构分析及验证第27-30页
     ·阶段小结第30页
   ·通过RT-PCR 考察waaC 基因敲除后ESA_04108 基因的表达水平差异第30-31页
     ·RT-PCR 考察ESA_04108 基因表达水平差异第30-31页
     ·阶段小结第31页
   ·LPS 结构突变株LWW02 的细胞生长速率、细胞形态分析第31-33页
     ·生长速率测定第31-32页
     ·TEM 观察细胞形态变化第32页
     ·阶段小结第32-33页
   ·LPS 结构突变株LWW02 的菌膜形成能力变化的研究第33-40页
     ·亲疏水介质表面的菌膜形成能力分析第33-35页
     ·从细胞表面疏水性角度分析LWW02 的菌膜形成能力变化第35-36页
     ·从细胞外膜通透性角度分析LWW02 的菌膜形成能力变化第36-37页
     ·从自凝集能力角度分析LWW02 的菌膜形成能力变化第37-38页
     ·从胞外多糖含量角度分析LWW02 的菌膜形成能力变化第38-39页
     ·从黄色素产量角度分析LWW02 的菌膜形成能力变化第39页
     ·从运动性角度分析LWW02 的菌膜形成能力变化第39-40页
     ·阶段小结第40页
   ·结论第40-41页
   ·展望第41-42页
致谢第42-43页
参考文献第43-50页
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文第50页

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