| 目录 | 第1-6页 |
| 图表目录 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 引言 | 第12-15页 |
| 材料和方法 | 第15-36页 |
| 实验材料 | 第15-18页 |
| 1 主要表达载体 | 第15页 |
| 2 菌株 | 第15页 |
| 3 主要工具酶及试剂盒 | 第15-16页 |
| 4 主要抗体 | 第16-17页 |
| 5 所用引物 | 第17-18页 |
| 实验方法 | 第18-36页 |
| ·组织样品来源 | 第18页 |
| ·细胞系及培养条件 | 第18页 |
| ·基因克隆 | 第18-22页 |
| ·RNA提取及cDNA文库构建 | 第22-24页 |
| ·组织DNA的提取制备 | 第24页 |
| ·Real Time PCR分析 | 第24-25页 |
| ·重组腺病毒的构建包装 | 第25-27页 |
| ·细胞的质粒转染和腺病毒感染 | 第27-28页 |
| ·细胞生长曲线绘制 | 第28页 |
| ·细胞集落形成实验 | 第28页 |
| ·细胞凋亡检测方法 | 第28-30页 |
| ·线粒体膜电位变化的检测 | 第30页 |
| ·细胞荧光观察蛋白定位 | 第30-31页 |
| ·MAPK通路报告基因实验 | 第31页 |
| ·Northern blot | 第31-32页 |
| ·Western blot | 第32页 |
| ·裸鼠动物实验 | 第32-33页 |
| ·原核蛋白的表达纯化 | 第33-34页 |
| ·转基因操作(实验由医科院动物所宋铭晶老师完成) | 第34页 |
| ·免疫组织化学染色 | 第34-35页 |
| ·常用生物信息网站 | 第35页 |
| ·统计学处理 | 第35-36页 |
| 实验结果与讨论 | 第36-85页 |
| 第一部分 DENND2D的功能研究 | 第36-71页 |
| 1 DENND2D的表达谱分析结果 | 第36-39页 |
| ·DENND2D正常组织表达谱 | 第36-37页 |
| ·DENND2D在肺鳞癌配对组织中的表达谱 | 第37-38页 |
| ·DENND2D的电子表达谱 | 第38-39页 |
| 2 DENND2D的凋亡诱导作用 | 第39-49页 |
| ·Ad-TRET-DENND2D重组腺病毒包装和鉴定 | 第39-41页 |
| ·DENND2D在H1299细胞中的诱导凋亡表型 | 第41-43页 |
| ·DENND2D在多种肺癌细胞系中的凋亡诱导作用 | 第43-46页 |
| ·DENND2D凋亡诱导机制探讨 | 第46-49页 |
| 3 DENND2D的蛋白定位和对MAPK通路的影响 | 第49-54页 |
| ·DENND2D的蛋白定位 | 第49-52页 |
| ·DENND2D对MAPK通路的影响 | 第52-54页 |
| 4 DENND2D的体内抑瘤作用 | 第54-62页 |
| ·DENND2D ex-vivo水平的抑瘤作用 | 第54-57页 |
| ·DENND2D的in-vivo水平抑瘤作用 | 第57-61页 |
| ·Ad-DENND2D的生物安全性评价 | 第61-62页 |
| 5 关于DENND2D功能研究的讨论 | 第62-70页 |
| ·关于DENND2D表达谱 | 第62-63页 |
| ·关于DENND2D的凋亡诱导作用 | 第63-65页 |
| ·关于DENND2D的定位和对MAPK通路的影响 | 第65-67页 |
| ·关于DENND2D的体内作用 | 第67-70页 |
| 6 关于DENND2D研究内容小结 | 第70-71页 |
| 第二部分 OLC1基因的功能研究 | 第71-85页 |
| 1 OLC1的四环素诱导表达腺病毒系统构建 | 第71-74页 |
| ·pShttle-TRET-OLC1穿梭载体构建 | 第71页 |
| ·pAd-TRET-OLC1重组腺病毒载体构建和鉴定 | 第71-72页 |
| ·Ad-TRET-OLC1重组腺病毒的包装扩增和滴度测定 | 第72页 |
| ·Ad-TRET-OLC1重组腺病毒的验证 | 第72-74页 |
| 2 OLC1单抗的制备和验证 | 第74-75页 |
| ·OLC1原核蛋白的表达纯化 | 第74页 |
| ·单克隆抗体的制备、纯化以及特异性鉴定 | 第74-75页 |
| 3 OLC1转基因小鼠的制备 | 第75-81页 |
| ·注射用DNA的制备(广谱表达和肺组织特异表达) | 第75-76页 |
| ·转基因过程 | 第76页 |
| ·转基因阳性鼠的鉴定 | 第76-77页 |
| ·转基因鼠的生物观察 | 第77页 |
| ·转基因鼠肺组织结构观察 | 第77-81页 |
| 4 关于OLC1研究的讨论 | 第81-84页 |
| 5 OLC1研究内容总结 | 第84-85页 |
| 附加研究内容 | 第85-94页 |
| 新的肺癌候选癌基因RAP2B的鉴定和功能研究初探 | 第85-94页 |
| 文献综述 | 第94-113页 |
| 肺癌的研究进展 | 第94-102页 |
| MicroRNA与肿瘤 | 第102-113页 |
| 附录 | 第113-120页 |
| 1 英文缩略词 | 第113-114页 |
| 2 主要仪器设备及耗材 | 第114-116页 |
| 3 常用载体图谱 | 第116-120页 |
| 参考文献 | 第120-130页 |
| 致谢 | 第130-132页 |
| 基金资助 | 第132-134页 |
| 个人简历 | 第134-135页 |
