| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-14页 |
| 1 前言 | 第14-23页 |
| ·裂殖酵母中调控细胞胞质分裂的信号途径SIN | 第14-17页 |
| ·SIN的蛋白组份及其功能 | 第14-16页 |
| ·SIN信号通路的保守性 | 第16-17页 |
| ·细胞核分裂与细胞胞质分裂的准确协调及Dma1在这一过程中的功能 | 第17-19页 |
| ·Dma1与人类肿瘤抑制因子Chfr具有序列同源性 | 第17-18页 |
| ·Dma1通过抑制SIN信号途径阻止胞质分裂的起始 | 第18-19页 |
| ·Dnt1是一个新发现的有丝分裂早期的抑制因子 | 第19-20页 |
| ·CDK1对有丝分裂的调控 | 第20-21页 |
| ·Plo1在有丝分裂中的调控作用 | 第21-23页 |
| ·plo1-24C和plo1-25突变体的早期呈现染色体过度集缩的表型 | 第21-22页 |
| ·cutl2.1对Plo1激酶活性的调控 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-46页 |
| ·材料 | 第23-34页 |
| ·大肠杆菌菌株 | 第23页 |
| ·酵母菌株 | 第23-24页 |
| ·质粒 | 第24-25页 |
| ·引物 | 第25-26页 |
| ·分子生物学工具酶 | 第26页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第26-27页 |
| ·主要仪器与设备 | 第27-28页 |
| ·常用培养基和缓冲液 | 第28-34页 |
| ·方法 | 第34-46页 |
| ·酵母杂交 | 第34-35页 |
| ·带有标签的Dnt1-12myc表达载体的构建 | 第35-37页 |
| ·细菌和酵母转化 | 第37-38页 |
| ·目的蛋白在酵母或细菌体内的诱导表达 | 第38-39页 |
| ·目的蛋白的检测 | 第39页 |
| ·免疫印迹检测 | 第39页 |
| ·蛋白体外结合 | 第39-40页 |
| ·免疫共沉淀 | 第40页 |
| ·定点突变的构建 | 第40-43页 |
| ·Dnt1蛋白去磷酸化处理 | 第43-44页 |
| ·蛋白纯化后的去磷酸化处理 | 第44-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-67页 |
| ·带有标签的蛋白Dnt1-12myc在酵母中的表达 | 第46-50页 |
| ·基因dnt1的扩增 | 第46页 |
| ·融和表达载体pNCH472-dnt1的构建 | 第46-47页 |
| ·融和表达质粒pNCH472-dnt1的筛选 | 第47-48页 |
| ·质粒pNCH1472-dnt1的酵母转化 | 第48-49页 |
| ·Dnt1-12myc融合蛋白的诱导表达 | 第49页 |
| ·Dnt1-12myc融合蛋白表达的检测 | 第49-50页 |
| ·融合蛋白MBP-Dma1在细菌中的表达检测 | 第50-51页 |
| ·MBP-dam1表达质粒的转化 | 第50页 |
| ·MBP-Dma1的细菌内诱导表达 | 第50页 |
| ·MBP-Dma1蛋白的检测 | 第50-51页 |
| ·细菌内表达的MBP-Dma1与酵母表达的Dnt1-12myc的相互作用 | 第51-52页 |
| ·体外pull-down | 第51页 |
| ·Dma1与Dnt1的体外结合依赖FHA结构域 | 第51-52页 |
| ·Dma1蛋白与磷酸化的Dnt1蛋白的相互作用 | 第52-56页 |
| ·与Dma1相互作用的Dnt1为磷酸化蛋白 | 第52-54页 |
| ·λ-PPase处理可以减弱或去除已经与Dma1结合的Dnt1 | 第54-55页 |
| ·λ-PPase处理表达Dnt1-13myc的酵母裂解液可以减弱Dma1与其结合的强度 | 第55-56页 |
| ·CDK1激酶对Dnt1与Dma1相互作用的潜在影响 | 第56-60页 |
| ·7个CDK1磷酸化位点突变了的dnt1酵母表达质粒的构建 | 第56-57页 |
| ·质粒pNCH1472-Dnt1(7A)的酵母转化和Dnt1(7A)-12myc蛋白的诱导表达 | 第57页 |
| ·MBP pull-down | 第57页 |
| ·Dma1与Dnt1(7A)的体外相互作用的检测 | 第57-58页 |
| ·突变质粒pNCH1472-Dnt1(11A)的构建 | 第58-59页 |
| ·质粒pNCH1472-dnt1(11A)的酵母转化Dnt1(11A)-12myc蛋白的诱导表达 | 第59页 |
| ·MBP pull-down | 第59页 |
| ·Dma1与Dnt1(11A)的体外结合的检测 | 第59-60页 |
| ·Plo1激酶对Dma1与Dnt1结合的影响 | 第60-67页 |
| ·plo1-24C和plo1-25激酶突变体对Dma1与Dnt1相互作用的影响 | 第61-65页 |
| ·cut12.1突变体对Dma1与Dnt1相互作用的影响 | 第65-67页 |
| 4 结论与讨论 | 第67-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
