| 中文摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-13页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 目录 | 第14-18页 |
| 前言 | 第18-20页 |
| 第一部分 文献综述 | 第20-38页 |
| 1 抗菌肽的研究进展 | 第20-22页 |
| ·抗菌肽的发现与分类 | 第20-21页 |
| ·抗菌肽数据库 | 第21-22页 |
| 2 抗菌肽的生物学活性 | 第22-25页 |
| ·抗细菌活性 | 第22-23页 |
| ·抗原虫活性 | 第23页 |
| ·抗真菌活性 | 第23-24页 |
| ·抗病毒活性 | 第24页 |
| ·抗肿瘤活性 | 第24页 |
| ·免疫调节作用 | 第24-25页 |
| 3 昆虫攻击素(Attacin)、死亡素(Thanatin)的研究进展 | 第25-30页 |
| ·昆虫抗菌肽攻击素(Attacin)的研究进展 | 第25-28页 |
| ·抗菌肽死亡素(Thanatin)的研究进展 | 第28-30页 |
| 4 抗菌肽的结构、功能及作用机制 | 第30-33页 |
| ·结构与功能的关系 | 第31页 |
| ·作用机制 | 第31-33页 |
| 5 新型抗菌肽的改造研究进展 | 第33-35页 |
| 6 抗菌肽的基因工程研究进展 | 第35-36页 |
| 7 抗菌肽的开发应用前景及在畜牧生产上的应用 | 第36-38页 |
| 第二部分 本课题研究的目的、意义、内容及技术路线 | 第38-41页 |
| 1 本研究的目的 | 第38页 |
| 2 本研究的内容 | 第38-39页 |
| 3 本研究的意义 | 第39页 |
| 4 本研究的总体技术路线 | 第39-41页 |
| 第三部分 试验研究 | 第41-140页 |
| 试验一 果蝇抗菌肽Attacin A基因的分子克隆及生物信息学分析 | 第41-64页 |
| 1 材料和方法 | 第41-50页 |
| ·试验材料 | 第41-42页 |
| ·试验方法 | 第42-50页 |
| ·技术路线 | 第42页 |
| ·引物的设计与合成 | 第42-43页 |
| ·果蝇培养及诱导刺激 | 第43页 |
| ·果蝇总RNA模板的制备 | 第43-44页 |
| ·果蝇抗菌肽AttA基因的RT-PCR扩增 | 第44-45页 |
| ·果蝇抗菌肽AttA基因RT-PCR扩增产物的TA克隆 | 第45-47页 |
| ·果蝇抗菌肽AttA基因TA克隆质粒的鉴定 | 第47-49页 |
| ·果蝇抗菌肽AttA基因、氨基酸序列及高级结构分析 | 第49-50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-60页 |
| ·果蝇抗菌肽AttA基因RT-PCR扩增电泳 | 第50页 |
| ·果蝇抗菌肽AttA基因TA克隆质粒鉴定 | 第50-51页 |
| ·果蝇抗菌肽AttA基因序列测定及结果分析 | 第51-52页 |
| ·果蝇抗菌肽AttA基因生物信息学分析结果 | 第52-60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| ·果蝇抗菌肽AttA的生物学功能 | 第60-61页 |
| ·果蝇抗菌肽AttA基因序列分析 | 第61-62页 |
| ·果蝇抗菌肽AttA的高级结构分析 | 第62页 |
| 4 小结 | 第62-64页 |
| 试验二 抗菌肽AttA与Thanatin杂合基因设计、生成及序列分析 | 第64-80页 |
| 1 材料和方法 | 第64-70页 |
| ·试验材料 | 第64页 |
| ·试验方法 | 第64-70页 |
| ·技术路线 | 第64-65页 |
| ·杂合肽AT设计 | 第65-66页 |
| ·杂合肽AT基因优化 | 第66-67页 |
| ·杂合肽AT基因生成 | 第67-70页 |
| ·杂合肽AT基因的TA克隆及序列测定 | 第70页 |
| ·杂合肽AT基因序列分析 | 第70页 |
| 2 结果与分析 | 第70-73页 |
| ·杂合肽基因AT(pe)、AT(ee)的PCR生成 | 第70页 |
| ·杂合肽基因AT(pe)、AT(ee)的TA克隆质粒鉴定 | 第70-71页 |
| ·杂合肽基因AT(pe)、AT(ee)的TA克隆质粒测序结果 | 第71页 |
| ·杂合肽AT氨基酸序列分析 | 第71-73页 |
| 3 讨论 | 第73-79页 |
| ·杂合肽AT的分子设计 | 第73-75页 |
| ·杂合肽的连接策略 | 第75-76页 |
| ·杂合肽AT基因的优化 | 第76-78页 |
| ·杂合肽AT基因的生成策略 | 第78-79页 |
| 4 小结 | 第79-80页 |
| 试验三 杂合抗菌肽AT基因原核表达基因工程菌的构建及其生物学活性研究 | 第80-109页 |
| 1 材料和方法 | 第80-90页 |
| ·试验材料 | 第80-81页 |
| ·试验方法 | 第81-90页 |
| ·技术路线 | 第81-83页 |
| ·抗菌肽AttA基因原核表达目的基因TA克隆的构建 | 第83页 |
| ·杂合肽AT基因表达载体pET-mAT(pe)、pET-mA(pe)的构建 | 第83-84页 |
| ·重组原核表达载体在大肠杆菌系统中的探索性表达 | 第84-87页 |
| ·原核融合表达产物体内抑菌活性研究 | 第87-88页 |
| ·原核融合表达产物优化表达及蛋白的纯化 | 第88-89页 |
| ·原核融合表达产物生物学活性分析 | 第89-90页 |
| 2 结果 | 第90-103页 |
| ·抗菌肽AttA原核表达基因TA克隆质粒的构建 | 第90-91页 |
| ·原核表达载体pET-mAT(pe)、pET-mA(pe)的构建 | 第91-92页 |
| ·重组原核表达载体在大肠杆菌系统中的表达 | 第92-97页 |
| ·原核融合表达产物体内抑菌活性研究 | 第97-101页 |
| ·原核融合表达产物纯化及回收 | 第101页 |
| ·原核融合表达产物体外抑菌活性及溶血活性研究 | 第101-103页 |
| 3 讨论 | 第103-107页 |
| ·原核表达系统及载体的选择 | 第103-104页 |
| ·影响外源基因表达的因素 | 第104-105页 |
| ·重组原核表达载体的构建及表达 | 第105-106页 |
| ·关于抗菌肽mAT及mA体内活性检测方法的建立 | 第106-107页 |
| ·关于杂合抗菌肽融合表达产物活性的研究 | 第107页 |
| 4 小结 | 第107-109页 |
| 试验四 杂合肽AT基因真核表达基因工程菌的构建及活性研究 | 第109-130页 |
| 1 材料和方法 | 第109-117页 |
| ·试验材料 | 第109页 |
| ·试验方法 | 第109-117页 |
| ·技术路线 | 第109-111页 |
| ·真核表达载体pEGFP-mAT(ee)、pEGFP-mA(ee)构建 | 第111-112页 |
| ·真核表达载体pCI-mAT(ee)、pCI-mA(ee)构建 | 第112-113页 |
| ·pEGFP-mAT(ee)、pEGFP-mA(ee)在Vero细胞中瞬时表达研究 | 第113-115页 |
| ·pCI-mAT(ee)、pCI-mA(ee)在Vero细胞中稳定表达研究 | 第115-116页 |
| ·pCI-mAT(ee)、pCI-mA(ee)表达产物抑菌活性的测定 | 第116-117页 |
| 2 结果与分析 | 第117-126页 |
| ·真核表达载体pEGFP-mAT(ee)、pEGFP-mA(ee)的构建 | 第117-118页 |
| ·真核表达载体pCI-mAT(ee)、pCI-mA(ee)的构建 | 第118-119页 |
| ·pEGFP-mAT(ee)、pEGFP-mA(ee)在Vero细胞中瞬时表达 | 第119-122页 |
| ·pCI-mAT(ee)、pCI-mA(ee)在Vero细胞中稳定表达 | 第122-126页 |
| ·pCI-mAT(ee)、pCI-mA(ee)表达产物抑菌活性的测定 | 第126页 |
| 3 讨论 | 第126-129页 |
| ·关于重组真核表达载体的构建 | 第126-127页 |
| ·关于增强型绿色荧光蛋白融合表达载体 | 第127-128页 |
| ·关于抗菌肽的真核表达研究 | 第128-129页 |
| 4 小结 | 第129-130页 |
| 试验五 重组抗菌肽AT、mA在断奶小鼠上的生物学功效 | 第130-140页 |
| 1 材料与方法 | 第130-132页 |
| ·试验用材料 | 第130页 |
| ·试验设计 | 第130页 |
| ·试验动物及饲粮 | 第130-131页 |
| ·样品采集 | 第131页 |
| ·考察指标及测定方法 | 第131-132页 |
| 2 数据统计和分析 | 第132页 |
| 3 结果与分析 | 第132-135页 |
| ·重组抗菌肽AT及mA对小鼠生长性能的影响 | 第132页 |
| ·重组抗菌肽AT及mA对小鼠免疫器官相对重量的影响 | 第132-133页 |
| ·重组抗菌肽AT及mA对小肠粘膜形态的影响 | 第133-134页 |
| ·重组抗菌肽AT及mA对小鼠免疫功能的影响 | 第134-135页 |
| 4 讨论 | 第135-139页 |
| ·重组抗菌肽AT及mA对小鼠生长性能的影响 | 第136-138页 |
| ·重组抗菌肽AT及mA对小鼠免疫的影响 | 第138-139页 |
| 5 小结 | 第139-140页 |
| 第四部分 全文总结与结论 | 第140-142页 |
| 第五部分 本研究的创新点 | 第142页 |
| 第六部分 本研究的展望与建议 | 第142-143页 |
| 参考文献 | 第143-157页 |
| 致谢 | 第157-158页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第158页 |
| 获奖情况 | 第158-159页 |
| 附录 | 第159-165页 |
