| 第一部分 NRF-1和ERRα是介导PGC-1β调节小鼠C2C12细胞线粒体生物合成中的重要转录因子 | 第1-68页 |
| 中文摘要 | 第7-8页 |
| 英文摘要 | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-11页 |
| 材料与方法 | 第11-43页 |
| 1.实验材料 | 第11-21页 |
| ·菌株和细胞系 | 第11页 |
| ·质粒载体 | 第11-17页 |
| ·工具酶及分子量标准 | 第17页 |
| ·试剂盒 | 第17-18页 |
| ·主要化学试剂(按试剂公司分类) | 第18-19页 |
| ·分析软件 | 第19-20页 |
| ·引物序列 | 第20-21页 |
| 2.实验方法 | 第21-43页 |
| ·质粒载体的构建 | 第21-28页 |
| ·细胞培养 | 第28-29页 |
| ·细胞瞬时转染 | 第29页 |
| ·重组腺病毒的构建与包装 | 第29-31页 |
| ·双荧光素酶报告实验测定启动子活性 | 第31-32页 |
| ·总RNA提取及cDNA合成 | 第32-33页 |
| ·细胞基因组的提取 | 第33-35页 |
| ·Real-Time PCR实验 | 第35页 |
| ·Western blot | 第35-37页 |
| ·蛋白质免疫共沉淀 | 第37-38页 |
| ·GST pull-down实验 | 第38-39页 |
| ·线粒体标记及含量检测 | 第39-40页 |
| ·细胞耗氧的测定 | 第40页 |
| ·肝原代细胞的分离以及培养 | 第40-42页 |
| ·统计学方法 | 第42-43页 |
| 实验流程 | 第43-44页 |
| 实验结果 | 第44-59页 |
| 1.C2C12细胞分化过程中PGC家族及线粒体相关基因表达的检测 | 第44-45页 |
| 2.PGC-1β在C2C12细胞分化中的作用 | 第45-46页 |
| 3.PGC-1β在C2C12肌管细胞中可以促进线粒体相关基因表达 | 第46-47页 |
| 4.介导PGC-1β调节线粒体生物合成相关基因表达的转录因子 | 第47-49页 |
| 5.NRF-1和PGC-1β在体内存在相互作用 | 第49-51页 |
| 6.NRF-1和PGC-1β在体外存在直接相互作用 | 第51-52页 |
| 7.干扰NRF-1和ERRα表达后抑制PGC-1β促进线粒体相关基因表达 | 第52-54页 |
| 8.干扰NRF-1和ERRα表达后抑制PGC-1β促进线粒体含量增加的作用 | 第54-57页 |
| 9.PGC-1β是通过NRF-1和ERRα介导而促进细胞呼吸 | 第57-59页 |
| 讨论 | 第59-62页 |
| 小结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 第二部分 NRF-1介导PGC1β促进ALAS-1表达而调控血红素生成 | 第68-85页 |
| 摘要 | 第68-69页 |
| 英文摘要 | 第69-70页 |
| 前言 | 第70-72页 |
| 材料与方法(见第一部分) | 第72页 |
| 实验流程 | 第72-73页 |
| 实验结果 | 第73-80页 |
| 1.肝脏中PGC-1β和ALAS-1在饥饿状态和再喂食状态表达变化一致 | 第73-74页 |
| 2.在大鼠肝原代细胞中过表达PGC1β可以促进ALAS-1表达 | 第74-75页 |
| 3.PGC1β是通过NRF-1而不是FOXA2介导激活ALAS-1启动子转录的 | 第75-77页 |
| 4.抑制NRF-1的表达后使PGC-1β对ALAS-1的激活作用减弱 | 第77-78页 |
| 5.PGC1β对肝脏亚铁血红素生物合成其他相关酶表达的调节 | 第78-79页 |
| 6.NRF-1介导PGC1β对肝脏亚铁血红素生物合成中相关酶表达的调节 | 第79-80页 |
| 讨论 | 第80-82页 |
| 小结 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-85页 |
| 附录 | 第85-86页 |
| 综述 | 第86-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
