| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-34页 |
| ·水貂简介 | 第19-20页 |
| ·类胰岛素生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）及其研究 | 第20-24页 |
| ·IGF-Ⅰ的构成 | 第20-21页 |
| ·IGF-Ⅰ的生物学功能 | 第21-22页 |
| ·IGF-Ⅰ在部分动物上的研究 | 第22-24页 |
| ·成骨细胞及其培养技术的研究进展 | 第24-28页 |
| ·成骨细胞的来源 | 第24页 |
| ·成骨细胞的作用及其在体内的生长过程 | 第24-25页 |
| ·成骨细胞体外培养技术的研究进展 | 第25-28页 |
| ·SNP 概述及其在动物遗传育种中的应用 | 第28-31页 |
| ·SNP 标记技术原理 | 第28页 |
| ·SNP 技术特点 | 第28-29页 |
| ·SNP 在动物遗传育种中的应用 | 第29-31页 |
| ·PCR-SSCP 技术介绍 | 第31-33页 |
| ·PCR-SSCP 的原理 | 第31-32页 |
| ·PCR-SSCP 的特点 | 第32-33页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第33-34页 |
| 第二章 水貂 IGF-Ⅰ基因的cDNA 克隆及序列分析 | 第34-50页 |
| ·实验材料 | 第34-36页 |
| ·实验动物 | 第34页 |
| ·菌株和质粒 | 第34页 |
| ·主要试剂和酶 | 第34-35页 |
| ·试验仪器 | 第35页 |
| ·试验主要试剂及配制 | 第35-36页 |
| ·试验方法 | 第36-39页 |
| ·样品的处理 | 第36页 |
| ·总RNA 的提取 | 第36-37页 |
| ·引物的设计 | 第37页 |
| ·RT-PCR | 第37-38页 |
| ·目的片段的纯化 | 第38页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备 | 第38页 |
| ·RT-PCR 产物与pMD19-T 载体的连接 | 第38页 |
| ·连接产物的转化 | 第38页 |
| ·重组质粒的提取及鉴定 | 第38-39页 |
| ·测序及序列分析 | 第39页 |
| ·结果 | 第39-46页 |
| ·水貂肝脏总RNA 提取 | 第39-40页 |
| ·RT-PCR 扩增结果 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第41-42页 |
| ·核苷酸及蛋白质序列分析 | 第42-46页 |
| ·讨论 | 第46-50页 |
| ·RNA 制备需要注意的问题 | 第46-47页 |
| ·关于引物设计 | 第47页 |
| ·生物信息学分析 | 第47-48页 |
| ·同源性比较分析 | 第48-50页 |
| 第三章 水貂 IGF-Ⅰ基因的原核表达和纯化 | 第50-67页 |
| ·实验材料 | 第50-52页 |
| ·实验动物 | 第50页 |
| ·菌株与质粒 | 第50页 |
| ·主要试剂和酶类 | 第50-51页 |
| ·实验仪器 | 第51页 |
| ·试验主要试剂的配制 | 第51-52页 |
| ·试验方法 | 第52-58页 |
| ·引物设计 | 第52页 |
| ·RT-PCR 反应 | 第52页 |
| ·目的片段的纯化 | 第52-53页 |
| ·pGEX-6p-1 空质粒的扩增 | 第53页 |
| ·表达载体的构建 | 第53-54页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第54页 |
| ·重组质粒pGEX-6p-1-IGF-Ⅰ的初步诱导表达及表达产物分析前的处理 | 第54-55页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第55-56页 |
| ·表达产物的Western Blotting 分析 | 第56页 |
| ·重组质粒诱导表达条件的优化 | 第56-57页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第57页 |
| ·目的蛋白的浓缩及含量测定 | 第57页 |
| ·目的蛋白的western-blotting 检测 | 第57-58页 |
| ·实验结果 | 第58-63页 |
| ·成熟片段扩增结果 | 第58页 |
| ·表达载体鉴定 | 第58-60页 |
| ·重组质粒pGEX-6p-1-IGF-Ⅰ的表达结果 | 第60页 |
| ·重组质粒pGEX-6p-1-IGF-Ⅰ表达条件的优化 | 第60-61页 |
| ·重组蛋白表达形式的确定 | 第61-62页 |
| ·融合蛋白的纯化及酶切结果 | 第62-63页 |
| ·目的蛋白浓缩及含量的测定 | 第63页 |
| ·蛋白的western-blotting 检测结果 | 第63页 |
| ·讨论 | 第63-67页 |
| ·引物设计 | 第63-64页 |
| ·表达载体的选择 | 第64-65页 |
| ·蛋白质电泳（SDS-PAGE）及western blot | 第65页 |
| ·关于蛋白表达条件的优化 | 第65-66页 |
| ·关于层析技术 | 第66-67页 |
| 第四章 水貂成骨细胞的原代培养及鉴定 | 第67-75页 |
| ·实验材料 | 第67-68页 |
| ·实验动物 | 第67页 |
| ·主要试剂 | 第67页 |
| ·实验主要仪器 | 第67-68页 |
| ·实验主要试剂的配制 | 第68页 |
| ·方法 | 第68-70页 |
| ·水貂成骨细胞的原代培养 | 第68-69页 |
| ·水貂成骨细胞的传代培养 | 第69页 |
| ·水貂成骨细胞的冻存 | 第69页 |
| ·水貂成骨细胞的复苏 | 第69页 |
| ·水貂成骨细胞的鉴定 | 第69-70页 |
| ·结果 | 第70-72页 |
| ·形态学观察 | 第70页 |
| ·碱性磷酸酶染色鉴定 | 第70页 |
| ·骨钙素免疫组化鉴定 | 第70页 |
| ·钙化结节染色鉴定 | 第70-72页 |
| ·讨论 | 第72-75页 |
| ·成骨细胞的体外培养 | 第72-73页 |
| ·成骨细胞的生物学特性 | 第73-75页 |
| 第五章 重组 IGF-Ⅰ蛋白对水貂成骨细胞作用的研究 | 第75-79页 |
| ·实验材料 | 第75-76页 |
| ·材料 | 第75页 |
| ·主要试剂 | 第75页 |
| ·主要试剂的配制 | 第75-76页 |
| ·实验方法 | 第76页 |
| ·成骨细胞增值率的测定（MTT 法即噻唑蓝比色法） | 第76页 |
| ·碱性磷酸酶活性定量测定（PNPP 法） | 第76页 |
| ·数据处理 | 第76页 |
| ·实验结果 | 第76-77页 |
| ·重组 IGF-Ⅰ蛋白对成骨细胞增殖的作用 | 第76-77页 |
| ·重组 IGF-Ⅰ蛋白对水貂成骨细胞碱性磷酸酶活性的作用 | 第77页 |
| ·讨论 | 第77-79页 |
| ·关于MTT 法检测细胞增殖 | 第77页 |
| ·IGF-Ⅰ对成骨细胞功能的影响 | 第77-79页 |
| 第六章 水貂 IGF-Ⅰ基因的遗传多态分析 | 第79-91页 |
| ·实验材料 | 第79-81页 |
| ·实验动物 | 第79-80页 |
| ·实验主要仪器 | 第80页 |
| ·试验主要试剂及配制 | 第80-81页 |
| ·实验方法 | 第81-84页 |
| ·血样的采集 | 第81页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第81-82页 |
| ·基因组DNA 的检测 | 第82页 |
| ·PCR 引物设计 | 第82页 |
| ·PCR 扩增 | 第82页 |
| ·PCR 扩增产物的检测 | 第82页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶的制备 | 第82-83页 |
| ·快速银染显色 | 第83页 |
| ·数据统计 | 第83-84页 |
| ·实验结果 | 第84-88页 |
| ·基因组DNA 提取 | 第84页 |
| ·PCR 扩增结果 | 第84-85页 |
| ·PCR 扩增产物的 SSCP 分析 | 第85页 |
| ·测序结果 | 第85-86页 |
| ·IGF-Ⅰ基因 Exon1 多态位点在不同水貂品种中的基因频率及基因型频率 | 第86-87页 |
| ·IGF-Ⅰ基因 Exon1 在各水貂群体间的遗传距离 | 第87页 |
| ·聚类分析 | 第87-88页 |
| ·讨论 | 第88-91页 |
| ·样品的选择 | 第88页 |
| ·关于PCR-SSCP | 第88-89页 |
| ·水貂 IGF-Ⅰ基因 Exon1 的 PCR-SSCP 检测结果 | 第89-90页 |
| ·水貂群体间的遗传结构比较 | 第90-91页 |
| 第七章 全文结论 | 第91-93页 |
| ·结论 | 第91页 |
| ·本研究的创新点 | 第91页 |
| ·下一步要进行的工作 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 作者简历 | 第104页 |
