| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-12页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 前言 | 第14-18页 |
| 实验材料 | 第18-21页 |
| 一、主要试剂 | 第18页 |
| 二、主要仪器 | 第18页 |
| 三、主要溶液及试剂配制 | 第18-21页 |
| 第一部分 SARS冠状病毒PLpro蛋白酶的DUB活性检测 | 第21-30页 |
| 一、前言 | 第21页 |
| 二、方法 | 第21-23页 |
| 1. PLpro构建体(Construct)分子克隆 | 第22页 |
| 2. 突变体的构建 | 第22-23页 |
| 3. 细胞内去泛素(Deubiquitination)活性检测 | 第23页 |
| 三、结果 | 第23-28页 |
| 1. SARS-CoV PLpro不同结构构建体和酶活性缺失突变体构建 | 第23-25页 |
| 2. PLpro对Ub、UbK48、UbK63均具有DUB活性 | 第25-26页 |
| 3. PLpro的酶活性位点Cys-His-Asp与其DUB活性相关 | 第26页 |
| 4. PLpro的Ubl结构域与其DUB活性无关 | 第26-27页 |
| 5. NAB-G2M结构域缺失不影响PLpro的DUB活性 | 第27-28页 |
| 四、讨论 | 第28-30页 |
| 第二部分 SARS冠状病毒PLpro对宿主干扰素抗病毒天然免疫的调节作用 | 第30-38页 |
| 一、前言 | 第30-31页 |
| 二、方法 | 第31页 |
| 1. 荧光素酶报告基因检测 | 第31页 |
| 三、结果 | 第31-36页 |
| 1. PLpro-TM及酶活性缺失突变体对IFNβ通路具有抑制作用 | 第31-32页 |
| 2. PLpro-TM及突变体对IFNβ通路的抑制作用呈剂量依赖性 | 第32-34页 |
| 3. Ubl结构域不影响PLpro对IFNβ通路的抑制作用 | 第34-35页 |
| 4. NAB-G2M结构域不影响PLpro对IFNβ通路的抑制作用 | 第35-36页 |
| 四、讨论 | 第36-38页 |
| 第三部分 SARS冠状病毒PLpro通过阻断TRAF3复合体形成而负调节宿主干扰素表达 | 第38-48页 |
| 一、前言 | 第38-39页 |
| 二、方法 | 第39-40页 |
| 1. pcDNA3.1-HA-TRAF3重组质粒分子克隆 | 第39页 |
| 2. 免疫共沉淀(Co-IP) | 第39-40页 |
| 三、结果 | 第40-46页 |
| 1. pcDNA3.1-HA-TRAF3重组质粒构建 | 第40页 |
| 2. PLpro-TM与TRAF3/IKKε/TBK1/ERIS相互作用 | 第40-42页 |
| 3. PLpro-TM通过阻断TRAF3复合体形成从而抑制干扰素表达通路 | 第42-45页 |
| 4. PLpro-TM对干扰素通路调节蛋白的DUB活性 | 第45-46页 |
| 四、讨论 | 第46-48页 |
| 结论 | 第48-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 发表论文 | 第56-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 个人简历 | 第76页 |
