| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-5页 |
| 中文文摘 | 第5-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 绪论 | 第11-23页 |
| 1 色氨酸理化性质 | 第11页 |
| 2 色氨酸应用 | 第11-12页 |
| ·医学应用 | 第11-12页 |
| ·食品工业应用 | 第12页 |
| ·饲料添加剂 | 第12页 |
| 3 色氨酸生产方法 | 第12-14页 |
| ·蛋白质水解及化学合成法 | 第12-13页 |
| ·酶法 | 第13页 |
| ·微生物前体转化法 | 第13-14页 |
| ·直接发酵法 | 第14页 |
| 4 代谢工程在色氨酸生产菌株构建中的应用 | 第14-16页 |
| 5 色氨酸合成途径及代谢调控机制 | 第16-17页 |
| 6 高密度发酵及透明颤菌血红蛋白的应用 | 第17-18页 |
| 7 透明颤菌血红蛋白及其研究应用进展 | 第18-21页 |
| ·透明颤菌血红蛋白简介 | 第18-19页 |
| ·VHb的结构与特性 | 第19-20页 |
| ·VHb的作用机制 | 第20-21页 |
| 8 本课题研究内容及意义 | 第21-23页 |
| ·本课题研究目的和意义 | 第21-22页 |
| ·本课题研究内容 | 第22-23页 |
| 第一章 L-色氨酸高产菌株的选育 | 第23-33页 |
| ·前言 | 第23页 |
| ·实验材料 | 第23-25页 |
| ·菌种 | 第23-24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·相关溶液 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-27页 |
| ·诱变处理 | 第25页 |
| ·中间培养 | 第25页 |
| ·淘汰野生型(青霉素法) | 第25-26页 |
| ·营养缺陷型的检出 | 第26页 |
| ·缺陷型菌株摇瓶发酵 | 第26页 |
| ·色氨酸含量测定 | 第26-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-30页 |
| ·致死率计算 | 第27-28页 |
| ·酪氨酸营养缺陷型菌株的筛选 | 第28页 |
| ·色氨酸标准曲线的绘制 | 第28-30页 |
| ·小结 | 第30-33页 |
| 第2章 TrpE-A基因的克隆表达 | 第33-45页 |
| ·前言 | 第33页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-39页 |
| ·大肠杆菌总DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第34页 |
| ·引物设计与合成 | 第34-35页 |
| ·PCR扩增TrpEDCBA基因 | 第35页 |
| ·TrpEDCBA基因片段回收 | 第35-36页 |
| ·TrpEDCBA片段与pMD-T109质粒的酶切连接 | 第36-37页 |
| ·工程质粒的电击转化 | 第37页 |
| ·转化菌株的验证 | 第37-38页 |
| ·阳性克隆子的摇瓶发酵 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-42页 |
| ·TrpEDCBA基因的扩增 | 第39页 |
| ·重组质粒pMD-trp的构建 | 第39-40页 |
| ·工程菌MD-trp-06细胞总蛋白电泳 | 第40-41页 |
| ·邻氨基苯甲酸合成酶活性分析 | 第41页 |
| ·色氨酸合成酶活性分析 | 第41-42页 |
| ·MD-trp-06摇瓶发酵 | 第42页 |
| ·小结 | 第42-45页 |
| 第三章 透明颤菌血红蛋白在工程菌中表达及功能研究 | 第45-53页 |
| ·前言 | 第45-46页 |
| ·实验材料 | 第46页 |
| ·菌种和质粒 | 第46页 |
| ·培养基 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-48页 |
| ·DNA克隆操作 | 第46页 |
| ·工程菌的发酵培养 | 第46页 |
| ·细胞总蛋白SDS-PAGE | 第46页 |
| ·色氨酸含量测定 | 第46页 |
| ·表达载体pBR-trp-vgb的构建 | 第46-48页 |
| ·结果与分析 | 第48-52页 |
| ·vgb基因的完整表达框的建立 | 第48-50页 |
| ·表达载体pMD-trp-vgb的验证 | 第50页 |
| ·vgb基因序列测定 | 第50页 |
| ·vgb基因诱导表达 | 第50-51页 |
| ·vgb基因的表达对菌体生长及产酸能力影响 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| 总结与展望 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第61-63页 |
| 致谢 | 第63-65页 |
| 个人简历 | 第65-67页 |