| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-16页 |
| 1 绪论 | 第16-29页 |
| ·纤维素的结构及功能 | 第16-17页 |
| ·植物纤维素合成酶基因研究概况 | 第17-25页 |
| ·植物纤维素合成酶基因的发现 | 第17页 |
| ·植物纤维素合成酶基因的命名 | 第17-18页 |
| ·植物纤维素合成酶的基因结构 | 第18-19页 |
| ·纤维素合成酶相似蛋白 | 第19-20页 |
| ·植物纤维素合成酶CesA的表达规律 | 第20-21页 |
| ·纤维素的生物合成 | 第21-24页 |
| ·纤维素合成酶功能的研究方法 | 第24页 |
| ·参与纤维素生物合成的其它基因 | 第24-25页 |
| ·林木纤维素合成酶基因研究进展 | 第25-26页 |
| ·现阶段尚需解决的问题 | 第26-27页 |
| ·本研究的目的、意义和主要内容 | 第27页 |
| ·研究的试验内容与技术路线 | 第27-29页 |
| ·试验内容 | 第27页 |
| ·技术路线 | 第27-29页 |
| 2 大青杨叶片总DNA的提取 | 第29-35页 |
| ·实验材料与方法 | 第29-31页 |
| ·植物材料 | 第29页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第29页 |
| ·提取方法 | 第29-30页 |
| ·总DNA质量检测与分析 | 第30-31页 |
| ·酶切反应 | 第31页 |
| ·RAPD反应 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-33页 |
| ·不同提取方法对总DNA提取的影响 | 第31-32页 |
| ·限制性内切酶酶解结果和RAPD反应结果 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| ·本章小结 | 第34-35页 |
| 3 大青杨纤维素合成酶基因(PuCesA6、PuCesA7)DNA片段的克隆与鉴定 | 第35-44页 |
| ·实验材料与试剂 | 第35页 |
| ·植物材料 | 第35页 |
| ·试剂与仪器 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-37页 |
| ·引物设计 | 第35-36页 |
| ·总DNA的提取 | 第36页 |
| ·PuCesA6、PuCesA7基因DNA片段的PCR扩增 | 第36页 |
| ·目的片段的回收 | 第36-37页 |
| ·目的片段与pMD18-T载体的连接转化测序 | 第37页 |
| ·测序结果的分析方法 | 第37页 |
| ·结果与分析 | 第37-42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 4 大青杨叶片总RNA的提取 | 第44-49页 |
| ·材料与方法 | 第44-46页 |
| ·植物材料 | 第44页 |
| ·主要试剂及处理 | 第44-45页 |
| ·提取方法 | 第45-46页 |
| ·总RNA质量检测与分析 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-47页 |
| ·电泳检测 | 第46页 |
| ·总RNA浓度及纯度检测 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| ·本章小结 | 第48-49页 |
| 5 大青杨纤维素合成酶基因(PuCesA6、PuCesA7)cDNA的克隆与分析 | 第49-60页 |
| ·材料与方法 | 第49-51页 |
| ·试验材料 | 第49页 |
| ·试验方法 | 第49-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-59页 |
| ·目的基因的扩增 | 第51页 |
| ·序列分析 | 第51-58页 |
| ·纤维素合酶蛋白的分子进化分析 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 6 纤维素合酶PuCesA6蛋白的亚细胞定位 | 第60-66页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·主要材料和试剂 | 第60页 |
| ·主要使用仪器 | 第60页 |
| ·方法 | 第60-63页 |
| ·带酶切位点的PuCesA6基因ORF的扩增 | 第60-61页 |
| ·瞬时表达载体的构建 | 第61-62页 |
| ·洋葱表皮细胞瞬时表达(基因枪法) | 第62-63页 |
| ·结果与分析 | 第63-64页 |
| ·瞬时表达载体构建及双酶切鉴定 | 第63-64页 |
| ·PuCesA6基因在洋葱表皮的瞬时表达 | 第64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| ·本章小结 | 第65-66页 |
| 7 PuCesA6正义表达载体的构建及遗传转化烟草 | 第66-81页 |
| ·试验材料 | 第66页 |
| ·菌株与载体 | 第66页 |
| ·主要试剂 | 第66页 |
| ·主要仪器 | 第66页 |
| ·方法 | 第66-73页 |
| ·带酶切位点的PuCesA6基因cDNA的扩增与鉴定 | 第66-67页 |
| ·正义表达载体的构建 | 第67-68页 |
| ·大青杨PuCesA6基因正义转化烟草 | 第68-72页 |
| ·烟草纤维细胞长度的测量 | 第72-73页 |
| ·结果与分析 | 第73-78页 |
| ·PuCesA6正义表达载体的构建与酶切鉴定 | 第73-74页 |
| ·烟草叶片培养基的优化 | 第74-75页 |
| ·农杆菌介导的烟草叶盘法基因转化因素处理结果 | 第75-76页 |
| ·正义转基因烟草的检测 | 第76-77页 |
| ·正义转基因烟草的特征 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-79页 |
| ·影响转化效率的因素 | 第78-79页 |
| ·正义表达转基因烟草的表现特征 | 第79页 |
| ·本章小结 | 第79-81页 |
| 8 PuCesA7反义表达载体的构建 | 第81-86页 |
| ·试验材料 | 第81页 |
| ·菌株与载体 | 第81页 |
| ·主要试剂 | 第81页 |
| ·主要仪器 | 第81页 |
| ·方法 | 第81-83页 |
| ·带酶切位点的PuCesA7基因cDNA的扩增与鉴定 | 第81-82页 |
| ·反义表达载体的构建 | 第82-83页 |
| ·结果与分析 | 第83-85页 |
| ·讨论 | 第85页 |
| ·本章小结 | 第85-86页 |
| 结论 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-95页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
