| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-16页 |
| 第一部分 绪论 | 第16-38页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-36页 |
| 1 甘薯的生产现状与应用 | 第17-21页 |
| ·甘薯生产利用现状 | 第17页 |
| ·甘薯的营养价值 | 第17-18页 |
| ·甘薯与食品加工 | 第18-19页 |
| ·甘薯与工业加工 | 第19-20页 |
| ·甘薯开发利用存在问题及建议 | 第20-21页 |
| 2 花色素苷与其生理保健功能 | 第21-25页 |
| ·清除自由基抗氧化作用 | 第24页 |
| ·抗肿瘤、降血压等其它功效 | 第24-25页 |
| 3 花色素苷生物合成的分子生物学 | 第25-36页 |
| ·生物合成途径的结构基因 | 第25-32页 |
| ·查尔酮合成酶(Chalcone synthase, CHS) | 第27-28页 |
| ·查尔酮异构酶(Chalcone isomerase, CHI) | 第28页 |
| ·黄烷酮3-羟化酶(Flavanone 3-hydroxylase, F3 H) | 第28-29页 |
| ·二氢黄酮醇4-还原酶(Dihydroflavonol 4-reductase, DFR) | 第29-30页 |
| ·花色素合成酶(Anthocyanidin synthase, ANS) | 第30-31页 |
| ·3-O-葡萄糖转移酶(3-O-glucosyltransferase,3GT) | 第31-32页 |
| ·参与花色素合成调控的转录因子 | 第32-33页 |
| ·花色素苷生物合成途径的基因工程 | 第33-36页 |
| 第二章 引言 | 第36-38页 |
| 第二部分 紫肉甘薯花色素苷生物合成途径关键酶基因的克隆、功能分析及表达特性研究 | 第38-110页 |
| 第一章 紫肉甘薯二氢黄酮醇-4-还原酶基因(IbDFR)的克隆、功能分析及表达特性研究 | 第38-82页 |
| ·材料与方法 | 第38-64页 |
| ·植物材料 | 第38页 |
| ·菌株与载体 | 第38页 |
| ·主要仪器和设备 | 第38-39页 |
| ·试剂盒及试剂 | 第39页 |
| ·自配的试剂 | 第39-40页 |
| ·常规方法介绍 | 第40-45页 |
| ·RNA的提取 | 第40-41页 |
| ·RNA的质量检测 | 第41-42页 |
| ·植物基因组DNA的提取 | 第42页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第42页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳后目标DNA片断的回收 | 第42-43页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第43页 |
| ·连接反应 | 第43-44页 |
| ·大肠杆菌DH5α/ BL21感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第44页 |
| ·连接产物或重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞 | 第44页 |
| ·重组子的鉴定、测序 | 第44-45页 |
| ·方法与步骤 | 第45-64页 |
| ·从紫肉甘薯块根RNA合成第一链cDNA | 第45-46页 |
| ·紫肉甘薯IbDFR基因的克隆 | 第46-50页 |
| ·IbDFR基因核心片段的获得 | 第46-47页 |
| ·IbDFR基因3’端片段的获得 | 第47-48页 |
| ·IbDFR基因5’端片段的获得 | 第48页 |
| ·IbDFR基因全长cDNA的克隆 | 第48-49页 |
| ·IbDFR基因的生物信息学分析 | 第49-50页 |
| ·IbDFR基因的功能分析 | 第50-64页 |
| ·IbDFR基因转化烟草的功能验证 | 第50-58页 |
| ·pCAMBIA1304+的构建 | 第50-51页 |
| ·IbDFR植物表达载体的设计 | 第51-53页 |
| ·p1304+-IbDFR载体构建过程 | 第53-54页 |
| ·植物表达载体对农杆菌的转化 | 第54-55页 |
| ·农杆菌EHA105介导p1304~+-IbDFR遗传转化烟草 | 第55-56页 |
| ·.1 烟草无菌苗的培养 | 第55页 |
| ·.2 农杆菌的培养 | 第55页 |
| ·.3 共培养 | 第55-56页 |
| ·.4 转基因烟草的诱导和再生 | 第56页 |
| ·转基因烟草的PCR和荧光定量PCR检测 | 第56-58页 |
| ·转基因烟草花色素苷含量检测 | 第58页 |
| ·IbDFR基因在大肠杆菌中的表达及功能验证 | 第58-64页 |
| ·IbDFR基因原核表达载体的构建 | 第58-60页 |
| ·IbDFR重组蛋白的诱导表达与纯化 | 第60-62页 |
| ·IbDFR重组蛋白的检测和含量测定 | 第62-63页 |
| ·IbDFR重组蛋白的活性测定 | 第63-64页 |
| ·IbDFR重组蛋白的圆二色谱分析 | 第64页 |
| ·结果与分析 | 第64-79页 |
| ·IbDFR基因的克隆 | 第64-70页 |
| ·紫肉甘薯块根总RNA的提取 | 第64-65页 |
| ·IbDFR基因全长cDNA序列分析 | 第65-66页 |
| ·IbDFR基因的生物信息学分析 | 第66-70页 |
| ·IbDFR蛋白的同源比对与系统进化分析 | 第66-69页 |
| ·IbDFR蛋白的二级结构和三级结构分析 | 第69-70页 |
| ·IbDFR基因的功能分析 | 第70-79页 |
| ·IbDFR基因植物表达载体构建与工程菌的获得 | 第70-71页 |
| ·IbDFR基因导入烟草及转化植株的获得 | 第71-73页 |
| ·转IbDFR基因烟草的PCR鉴定 | 第73-74页 |
| ·转IbDFR基因烟草花色素苷的测定 | 第74页 |
| ·IbDFR基因在烟草中荧光定量表达分析 | 第74-75页 |
| ·IbDFR基因原核表达载体及表达工程菌的构建 | 第75-76页 |
| ·IbDFR重组蛋白的获得和纯化 | 第76-77页 |
| ·IbDFR重组蛋白的酶活测定 | 第77-79页 |
| ·IbDFR重组蛋白的圆二色谱分析 | 第79页 |
| ·小结与讨论 | 第79-81页 |
| ·结论与展望 | 第81-82页 |
| 第二章 紫肉甘薯黄烷酮-3-羟化酶(IbF3H)和花色素合成酶(IbANS)基因的克隆与特征分析 | 第82-102页 |
| ·材料与方法 | 第82-89页 |
| ·植物材料 | 第82页 |
| ·试剂 | 第82页 |
| ·材料的准备、甘薯总RNA的提取、质量检测;DNA连接、转化和测序 | 第82页 |
| ·从紫肉甘薯块根RNA合成第一链cDNA | 第82页 |
| ·紫肉甘薯IbF3H基因的克隆 | 第82-85页 |
| ·IbF3H基因核心片段的获得 | 第82-83页 |
| ·IbF3H基因3’端片段的获得 | 第83-84页 |
| ·IbF3H基因5’端片段的获得 | 第84-85页 |
| ·IbF3H基因全长cDNA的克隆 | 第85页 |
| ·紫肉甘薯IbANS基因的克隆 | 第85-89页 |
| ·IbANS基因核心片段的获得 | 第85-86页 |
| ·IbANS基因3’端片段的获得 | 第86-87页 |
| ·IbANS基因5’端片段的获得 | 第87-88页 |
| ·IbANS基因全长cDNA的克隆 | 第88-89页 |
| ·IbF3H、IbANS基因的生物信息学分析 | 第89页 |
| ·结果与分析 | 第89-100页 |
| ·IbF3H基因的克隆 | 第89-95页 |
| ·IbF3H基因全长cDNA序列分析 | 第89-91页 |
| ·IbF3H基因的生物信息学分析 | 第91-95页 |
| ·IbF3H蛋白的同源比对与系统进化分析 | 第91-94页 |
| ·IbF3H基因的二级结构预测 | 第94-95页 |
| ·IbANS基因的克隆 | 第95-100页 |
| ·IbANS基因全长cDNA序列分析 | 第95-97页 |
| ·IbANS基因的生物信息学分析 | 第97-100页 |
| ·IbANS蛋白的同源比对与系统进化分析 | 第97-99页 |
| ·IbANS蛋白二级和三级结构分析 | 第99-100页 |
| ·小结与讨论 | 第100-101页 |
| ·结论与展望 | 第101-102页 |
| 第三章 紫肉甘薯花色素苷的生物合成与黄烷酮-3-羟化酶(IbF3H)、二氢黄酮醇-4-还原酶基因(IbDFR)和花色素合成酶(IbANS)基因的组织表达特征分析 | 第102-110页 |
| ·材料与方法 | 第102-104页 |
| ·植物材料 | 第102页 |
| ·试剂 | 第102页 |
| ·材料的准备、甘薯总RNA的提取、质量检测;DNA连接、转化和测序 | 第102页 |
| ·甘薯嫁接与管理 | 第102页 |
| ·甘薯花色苷含量检测 | 第102页 |
| ·甘薯IbF3H、IbDFR、IbANS等基因在各部位组织表达的荧光定量PCR检测 | 第102-104页 |
| ·结果与分析 | 第104-108页 |
| ·渝紫263各部位组织总RNA的提取 | 第104-105页 |
| ·甘薯嫁接试验花色素苷含量的分析 | 第105-106页 |
| ·IbF3H、IbDFR、IbANS等基因在渝紫263各部位组织表达的荧光定量分析 | 第106-108页 |
| ·小结与讨论 | 第108-109页 |
| ·结论与展望 | 第109-110页 |
| 第三部分 总结 | 第110-112页 |
| 1 主要结论 | 第110-111页 |
| 2 主要创新点 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-122页 |
| 附录1 缩略词 | 第122-123页 |
| 附录2 学习期间发表的论文和参加的科研项目 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
