| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 略缩语 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-16页 |
| 第一章 人脐静脉内皮细胞体外培养方法的建立和TNF-α对原代人脐静脉内皮细胞凋亡的影响 | 第16-50页 |
| ·材料、试剂及仪器 | 第16-20页 |
| ·材料 | 第16页 |
| ·试剂 | 第16-19页 |
| ·仪器 | 第19-20页 |
| ·试验方法 | 第20-29页 |
| ·人脐静脉内皮细胞培养 | 第20-21页 |
| ·人脐静脉内皮细胞鉴定 | 第21-22页 |
| ·Hoechst荧光染色法检测脐静脉内皮细胞凋亡 | 第22页 |
| ·TUNEL法检测脐静脉内皮细胞凋亡 | 第22-23页 |
| ·qRT-PCR法检测脐静脉内皮细胞凋亡 | 第23-27页 |
| ·Western blot法检测脐静脉内皮细胞凋亡 | 第27-28页 |
| ·透射电子显微镜观察微观结构 | 第28-29页 |
| ·实验设计与分组 | 第29页 |
| ·统计学处理 | 第29页 |
| ·结果 | 第29-44页 |
| ·人原代脐静脉内皮细胞培养与鉴定 | 第29-31页 |
| ·不同浓度TNF-α对脐静脉内皮细胞凋亡的影响 | 第31-40页 |
| ·TNF-α作用不同时间对脐静脉内皮细胞凋亡的影响 | 第40-44页 |
| ·讨论 | 第44-50页 |
| ·人脐静脉内皮细胞体外培养方法的建立 | 第44-45页 |
| ·TNF-α对脐静脉内皮细胞凋亡的影响 | 第45-50页 |
| 第二章 TNF-α诱导的原代人脐静脉内皮细胞凋亡的microRNA表达谱变化的研究 | 第50-77页 |
| ·材料、试剂及仪器 | 第50-51页 |
| ·材料 | 第50页 |
| ·试剂 | 第50页 |
| ·仪器 | 第50页 |
| ·人u Paraflo~(TM) microRNA芯片V14.0 | 第50-51页 |
| ·实验方法 | 第51-59页 |
| ·miRNA的提取 | 第51-52页 |
| ·miRNA样品标记 | 第52-53页 |
| ·miRNA芯片杂交 | 第53页 |
| ·miRNA芯片清洗 | 第53页 |
| ·芯片数据分析 | 第53-54页 |
| ·芯片质量控制 | 第54-55页 |
| ·实时荧光定量PCR法验证差异表达的基因 | 第55-59页 |
| ·实验设计及分组 | 第59页 |
| ·统计学处理 | 第59页 |
| ·结果 | 第59-72页 |
| ·RNA的质量检测 | 第59页 |
| ·RNA电泳图 | 第59-61页 |
| ·芯片杂交图像 | 第61-62页 |
| ·miRNA芯片的平均信号值 | 第62-68页 |
| ·芯片筛选的共同差异表达miRNA | 第68-69页 |
| ·聚类分析 | 第69-70页 |
| ·荧光实时定量PCR对芯片结果的验证 | 第70-72页 |
| ·讨论 | 第72-77页 |
| 第三章 microRNA-23a在TNF-α诱导的原代人脐静脉内皮细胞凋亡中的保护作用研究 | 第77-92页 |
| ·材料、试剂及仪器 | 第77页 |
| ·材料 | 第77页 |
| ·试剂 | 第77页 |
| ·仪器 | 第77页 |
| ·实验方法 | 第77-79页 |
| ·miRNA的提取 | 第77页 |
| ·miRNA定量检测 | 第77页 |
| ·细胞转染 | 第77-78页 |
| ·细胞转染效率 | 第78页 |
| ·Hoechst33258检测TNF-α诱导的内皮细胞凋亡 | 第78页 |
| ·TUNEL法检测TNF-α诱导的内皮细胞细胞凋亡 | 第78页 |
| ·qRT-PCR法检测TNF-α诱导的内皮细胞凋亡 | 第78-79页 |
| ·Western blot法检测TNF-α诱导的内皮细胞凋亡 | 第79页 |
| ·实验设计与分组 | 第79页 |
| ·统计学处理 | 第79页 |
| ·结果 | 第79-88页 |
| ·细胞转染效率 | 第79-80页 |
| ·miRNA-23a的抑制和过表达 | 第80-81页 |
| ·miRNA-23a对TNF-α诱导的内皮细胞凋亡的变化 | 第81-88页 |
| ·讨论 | 第88-92页 |
| 第四章 microRNA-23a抑制TNF-α诱导的原代人脐静脉内皮细胞凋亡的机制研 | 第92-104页 |
| ·材料、试剂及仪器 | 第92-93页 |
| ·材料 | 第92页 |
| ·试剂 | 第92页 |
| ·仪器 | 第92页 |
| ·预测软件 | 第92-93页 |
| ·实验方法 | 第93-94页 |
| ·细胞培养与转染 | 第93页 |
| ·细胞总RNA提取与质量检测 | 第93页 |
| ·qRT-PCR检测miRNA-23a inhibitor和Pre-miR-23a对靶基因mRNA表达的影响 | 第93页 |
| ·Western blot检测miRNA-23a inhibitor和Pre-miR-23a对靶基因蛋白水平表达的影响 | 第93页 |
| ·实验设计与分组 | 第93-94页 |
| ·统计学处理 | 第94页 |
| ·结果 | 第94-99页 |
| ·利用生物信息学分析miRNA-23a的靶基因 | 第94-95页 |
| ·定量PCR检测靶基因mRNA的表达 | 第95-97页 |
| ·Western blot检测靶基因蛋白的表达 | 第97-99页 |
| ·讨论 | 第99-104页 |
| 全文小结 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-117页 |
| 综述 | 第117-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第131页 |
