| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 英文缩写注释 | 第14-16页 |
| 前言 | 第16-20页 |
| 第一章 基因MIP2的生物信息学分析 | 第20-44页 |
| 1 材料与方法 | 第20-21页 |
| ·生物信息学分析软件 | 第20页 |
| ·Intemet服务器 | 第20-21页 |
| 2 实验结果与讨论 | 第21-42页 |
| ·MIP2基因的核酸序列分析 | 第21-29页 |
| ·MIP2的全长cDNA序列 | 第21-24页 |
| ·MIP2的碱基组成比例分析 | 第24页 |
| ·MIP2的碱基同源性分析 | 第24-26页 |
| ·MIP2的染色体定位 | 第26页 |
| ·MIP2的开放阅读框分析 | 第26-29页 |
| ·MIP2蛋白序列分析及结构预测 | 第29-39页 |
| ·MIP2蛋白的氨基酸组成分析 | 第29-30页 |
| ·人和大鼠MIP2氨基酸比对 | 第30-32页 |
| ·MIP2蛋白质功能预测 | 第32-37页 |
| ·MIP2蛋白信号肽预测分析 | 第32-33页 |
| ·MIP2蛋白疏水性分析 | 第33-34页 |
| ·MIP2蛋白可溶性分析 | 第34页 |
| ·MIP2蛋白结构域分析 | 第34-35页 |
| ·MIP2蛋白功能基序分析 | 第35页 |
| ·MIP2蛋白跨膜区分析 | 第35-36页 |
| ·MIP2蛋白亚细胞定位分析 | 第36-37页 |
| ·MIP2蛋白二级结构预测 | 第37-39页 |
| ·MIP2蛋白三维结构预测 | 第39页 |
| ·MIP2蛋白电子表达谱 | 第39-42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| 第二章 MIP2在缺血-再灌注心肌中的表达及亚细胞定位 | 第44-59页 |
| 1 材料与方法 | 第44-50页 |
| ·材料 | 第44-47页 |
| ·细胞系 | 第44-45页 |
| ·质粒 | 第45页 |
| ·主要试剂及来源 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45-46页 |
| ·主要试剂的配制 | 第46-47页 |
| ·方法 | 第47-50页 |
| ·大鼠心肌缺血-再灌注动物模型的建立 | 第47-48页 |
| ·心肌细胞氧化应激损伤模型制备 | 第48页 |
| ·总RNA的提取 | 第48页 |
| ·Real-time PCR | 第48页 |
| ·细胞转染 | 第48-49页 |
| ·MIP2稳定表达株的筛选 | 第49页 |
| ·荧光显微镜下观察融合蛋白亚细胞定位 | 第49页 |
| ·Western blotting检测MIP2在H9c2中的表达 | 第49-50页 |
| ·统计学分析 | 第50页 |
| 2 结果 | 第50-58页 |
| ·MIP2在大鼠缺血预适应心肌的表达 | 第50-51页 |
| ·MIP2在大鼠心肌缺血-再灌注时的时空表达模式 | 第51-54页 |
| ·从mRNA水平检测MIP2在大鼠心肌不同缺血时间的时空表达模式 | 第51-52页 |
| ·从mRNA水平检测MIP2在大鼠心肌不同再灌注时间的表达模式 | 第52-53页 |
| ·从蛋白质水平检测MIP2在大鼠心肌不同缺血时间的表达模式 | 第53-54页 |
| ·从蛋白质水平检测MIP2在大鼠心肌不同再灌注时间的表达模式 | 第54页 |
| ·氧化应激对H9c2细胞内源性MIP2表达的影响 | 第54-55页 |
| ·Western blotting检测GFP-MIP2在H9c2中的表达 | 第55-56页 |
| ·MIP2的亚细胞定位 | 第56-58页 |
| ·荧光显微镜下观察融合蛋白亚细胞定位 | 第56页 |
| ·荧光显微镜下观察MIP2与MitoTracker共定位 | 第56-57页 |
| ·荧光显微镜下观察H_2O_2处理后的MIP2亚细胞定位 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-59页 |
| 第三章 过表达MIP2促进H9c2心肌细胞的增殖 | 第59-68页 |
| 1 材料与方法 | 第59-63页 |
| ·材料 | 第59-61页 |
| ·细胞系 | 第59页 |
| ·抗体 | 第59-60页 |
| ·其他主要试剂及试剂盒 | 第60页 |
| ·主要仪器 | 第60-61页 |
| ·方法 | 第61-63页 |
| ·质粒的构建 | 第61页 |
| ·细胞培养及处理 | 第61页 |
| ·稳定转染MIP2细胞株的建立 | 第61-62页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第62页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第62页 |
| ·Western blotting分析 | 第62-63页 |
| ·流式细胞术 | 第63页 |
| ·统计学分析 | 第63页 |
| 2 结果 | 第63-66页 |
| ·MIP2单克隆细胞株鉴定 | 第63页 |
| ·过表达MIP2细胞增殖速度加快 | 第63-64页 |
| ·过表达MIP2促细胞增殖呈剂量依赖性 | 第64-65页 |
| ·MIP2过表达促进细胞从G1/G0期向S期的行进 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-68页 |
| 第四章 MIP2对过氧化氢所致心肌细胞损伤的保护作用 | 第68-84页 |
| 1 材料与方法 | 第68-73页 |
| ·材料 | 第68-70页 |
| ·细胞系 | 第68-69页 |
| ·抗体 | 第69页 |
| ·其他主要试剂及试剂盒 | 第69-70页 |
| ·主要仪器 | 第70页 |
| ·方法 | 第70-73页 |
| ·主要药物配置及处理 | 第70-71页 |
| ·RNA干扰及转染 | 第71页 |
| ·MTT比色法分析细胞存活率 | 第71页 |
| ·细胞线粒体蛋白的提取 | 第71-72页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第72页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第72页 |
| ·Western blotting分析 | 第72页 |
| ·免疫荧光分析 | 第72-73页 |
| ·统计学分析 | 第73页 |
| 2 结果 | 第73-81页 |
| ·过表达MIP2减轻H_2O_2所致的H9c2心肌细胞毒性作用 | 第73-75页 |
| ·过表达MIP2减轻H_2O_2所致的H9c2心肌细胞凋亡 | 第75-76页 |
| ·RNA干扰沉默MIP2表达抑制MIP2对氧化应激心肌细胞的保护作用 | 第76-78页 |
| ·过表达MIP2减轻H_2O_2所致的H9c2心肌细胞线粒体跨膜电位改变 | 第78-79页 |
| ·过表达MIP2对H_2O_2所致细胞色素C释放的影响 | 第79-81页 |
| ·过表达MIP2对H_2O_2所致H9c2细胞caspases活性的影响 | 第81页 |
| 3 讨论 | 第81-84页 |
| 总结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 综述 | 第91-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 攻读学位期间主要成果 | 第102-103页 |
