| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 文献综述 | 第12-22页 |
| 1 基因治疗 | 第12-16页 |
| ·治疗发展历程 | 第12-13页 |
| ·临床研究进展 | 第13-14页 |
| ·基因治疗要解决的问题 | 第14-15页 |
| ·基因治疗未来的发展 | 第15-16页 |
| 2 非病毒载体 | 第16-20页 |
| ·脂质体和脂质复合物 | 第17-18页 |
| ·阳离子多聚物 | 第18-19页 |
| ·聚乙烯亚胺 | 第18页 |
| ·壳聚糖 | 第18-19页 |
| ·其他阳离子多聚物 | 第19页 |
| ·分子偶联体 | 第19-20页 |
| 3 非病毒载体的细胞毒性与转染效率 | 第20-21页 |
| 4 小节 | 第21-22页 |
| 第一部分 寡聚苯乙烯氰乙烯改性蒙脱土的细胞毒性与凋亡及其机理研究 | 第22-45页 |
| 前言 | 第22-24页 |
| 材料与方法 | 第24-35页 |
| 1 仪器设备 | 第24-25页 |
| 2 材料与试剂 | 第25-27页 |
| ·菌种和细胞株 | 第25-26页 |
| ·试剂和药品 | 第26页 |
| ·抗体 | 第26页 |
| ·所需溶液 | 第26-27页 |
| 3 实验方法 | 第27-35页 |
| ·细胞培养 | 第27-28页 |
| ·细胞解冻培养 | 第27-28页 |
| ·细胞的传代培养 | 第28页 |
| ·细胞培养和处理 | 第28页 |
| ·LDH释放检测 | 第28-29页 |
| ·细胞生长抑制试验(MTT法) | 第29页 |
| ·Hoechst 33258染色 | 第29-30页 |
| ·流式细胞分析 | 第30页 |
| ·Caspase-3酶活性分析 | 第30页 |
| ·萤光素酶实验 | 第30-32页 |
| ·报告基因 | 第30-31页 |
| ·萤光素酶检验 | 第31-32页 |
| ·Western blot | 第32-33页 |
| ·RNA抽提和RT-PCR | 第33-34页 |
| ·统计学分析 | 第34-35页 |
| 结果与分析 | 第35-43页 |
| 1 LDH法和MTT法检测细胞毒性 | 第35-37页 |
| 2 PSAN-MMT对细胞凋亡的影响 | 第37-40页 |
| 3 Caspase-3酶活性检测 | 第40页 |
| 4 p53和NFκB转录活性检测 | 第40-41页 |
| 5 PSAN-MMT对p53蛋白表达量和mRNA水平的影响 | 第41-43页 |
| 讨论 | 第43-45页 |
| 第二部分 鱼精蛋白改性磷酸钙转染载体研究 | 第45-56页 |
| 前言 | 第45-47页 |
| 材料与方法 | 第47-49页 |
| 1 仪器设备与试剂配制 | 第47页 |
| 2 实验方法 | 第47-49页 |
| ·E.coli DH5α感受态的制备 | 第47页 |
| ·pEGFP-N1质粒的转化 | 第47-48页 |
| ·质粒的小量抽提 | 第48页 |
| ·质粒的中量制备 | 第48页 |
| ·鱼精蛋白改性磷酸钙的制备 | 第48-49页 |
| 结果与分析 | 第49-54页 |
| 1 质粒的转化 | 第49页 |
| 2 质粒DNA的浓度及纯度的测定 | 第49页 |
| 3 鱼精蛋白磷酸钙对细胞转染效率的提升 | 第49-50页 |
| 4 鱼精蛋白磷酸钙细胞转染效率的稳定性 | 第50-51页 |
| 5 鱼精蛋白改性磷酸钙和共沉淀法制备的磷酸钙粒径大小分析 | 第51-52页 |
| 6 鱼精蛋白改性磷酸钙的细胞毒性研究 | 第52-54页 |
| 讨论 | 第54-56页 |
| 结语 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-68页 |
| 附录: 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
