| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-22页 |
| 1.1 .棉花黄萎病 | 第14-19页 |
| 1.1.1 .棉花黄萎病的症状及为害 | 第14-15页 |
| 1.1.2 .大丽轮枝菌的分类及致病机制 | 第15页 |
| 1.1.3 .棉花抗黄萎病机制 | 第15-19页 |
| 1.2 .病毒诱导的基因沉默技术 | 第19页 |
| 1.3 .基因的电子克隆与RACE技术 | 第19-20页 |
| 1.3.1 .基因的电子克隆技术 | 第19-20页 |
| 1.3.2 .RACE技术 | 第20页 |
| 1.4 .亚细胞定位技术 | 第20页 |
| 1.5 .超表达技术 | 第20页 |
| 1.6 .本研究的目的、意义与内容 | 第20-22页 |
| 第二章 棉花黄萎病的防治技术研究 | 第22-25页 |
| 2.1 .实验材料 | 第22页 |
| 2.2 .实验方法 | 第22-23页 |
| 2.3 .实验结果 | 第23-24页 |
| 2.3.1 .不同处理的病情指数和防效 | 第23页 |
| 2.3.2 .不同处理的棉产量 | 第23-24页 |
| 2.4 .结论与讨论 | 第24-25页 |
| 第三章 VIGS技术鉴定抗黄萎病相关基因 | 第25-38页 |
| 3.1 .材料和试剂 | 第25页 |
| 3.1.1 .植物材料和病菌 | 第25页 |
| 3.1.2 .载体与菌株 | 第25页 |
| 3.1.3 .主要仪器设备 | 第25页 |
| 3.1.4 .试剂盒 | 第25页 |
| 3.1.5 .试剂的配制 | 第25页 |
| 3.2 .实验方法 | 第25-33页 |
| 3.2.1 .中植棉KV-3 的种植及培养 | 第25-26页 |
| 3.2.2 .目的基因的克隆 | 第26-28页 |
| 3.2.3 .沉默载体的构建 | 第28-30页 |
| 3.2.4 .沉默载体pCLCrVA-GhX转化农杆菌 | 第30-31页 |
| 3.2.5 .棉株的接种 | 第31页 |
| 3.2.6 .荧光定量PCR法检测目的基因表达量 | 第31-32页 |
| 3.2.7 .病菌的活化及接种 | 第32页 |
| 3.2.8 .沉默植株抗病性鉴定 | 第32页 |
| 3.2.9 .苔盼蓝染色 | 第32-33页 |
| 3.3 .实验结果 | 第33-37页 |
| 3.3.1 .沉默载体的构建 | 第33-34页 |
| 3.3.2 .VIGS技术沉默GhCLAI | 第34页 |
| 3.3.3 .目的基因表达量的测定 | 第34-35页 |
| 3.3.4 .沉默棉株抗病性鉴定 | 第35-37页 |
| 3.3.5 .苔盼蓝染色 | 第37页 |
| 3.4 .结论与讨论 | 第37-38页 |
| 第四章 陆地棉抗黄萎病相关基因GhAGD13和GhWRKY29 全长的克隆 | 第38-51页 |
| 4.1 .实验材料和试剂 | 第38页 |
| 4.1.1 .植物材料 | 第38页 |
| 4.1.2 .主要仪器设备 | 第38页 |
| 4.1.3 .主要试剂 | 第38页 |
| 4.2 .实验方法 | 第38-43页 |
| 4.2.1 .植物材料的种植 | 第38页 |
| 4.2.2 .RNA的提取 | 第38页 |
| 4.2.3 .c DNA的合成 | 第38页 |
| 4.2.4 .引物设计 | 第38-39页 |
| 4.2.5 .GhAGD13 全长克隆 | 第39-43页 |
| 4.2.6 .GhWRKY29 全长克隆 | 第43页 |
| 4.2.7 .GhAGD13和GhWRKY29 的生物信息学分析 | 第43页 |
| 4.3 .实验结果 | 第43-50页 |
| 4.3.1 .基因GhAGD13 的克隆 | 第43-44页 |
| 4.3.2 .基因GhAGD13 的生物信息学分析 | 第44-47页 |
| 4.3.3 .基因GhWRKY29 的生物信息学分析 | 第47-50页 |
| 4.4 .结论与讨论 | 第50-51页 |
| 第五章 基因GhAGD13、GhWRKY29 的亚细胞定位分析 | 第51-59页 |
| 5.1 .材料与试剂 | 第51页 |
| 5.1.1 .植物材料 | 第51页 |
| 5.1.2 .试剂 | 第51页 |
| 5.2 .实验方法 | 第51-56页 |
| 5.2.1 .植物材料的种植 | 第51页 |
| 5.2.2 .目的基因的克隆 | 第51-53页 |
| 5.2.3 .亚细胞定位载体的构建 | 第53-55页 |
| 5.2.4 .亚细胞定位载体转化农杆菌 | 第55页 |
| 5.2.5 .烟草的接种 | 第55-56页 |
| 5.2.6 .共聚焦显微镜观察 | 第56页 |
| 5.3 .实验结果 | 第56-58页 |
| 5.3.1 .亚细胞定位载体的构建 | 第56-57页 |
| 5.3.2 .激光共聚焦显微镜观察亚细胞定位结果 | 第57-58页 |
| 5.4 .结论与讨论 | 第58-59页 |
| 第六章 超表达技术研究基因GhAGD13、GhWRKY29 的功能 | 第59-71页 |
| 6.1 .材料与试剂 | 第59页 |
| 6.1.1 .植物材料与载体 | 第59页 |
| 6.1.2 .主要仪器设备 | 第59页 |
| 6.1.3 .主要试剂及配置方法 | 第59页 |
| 6.2 .实验方法 | 第59-65页 |
| 6.2.1 .基因GhAGD13、GhWRKY29 的扩增 | 第59-61页 |
| 6.2.2 .超表达载体的构建 | 第61-62页 |
| 6.2.3 .超表达载体转化农杆菌 | 第62-63页 |
| 6.2.4 .花浸法转化野生型拟南芥 | 第63-64页 |
| 6.2.5 .阳性苗的筛选 | 第64页 |
| 6.2.6 .基因GhAGD13和GhWRKY29 的表达分析 | 第64-65页 |
| 6.2.7 .超表达植株的抗病性鉴定 | 第65页 |
| 6.3 .实验结果 | 第65-69页 |
| 6.3.1 .超表达载体的构建 | 第65-66页 |
| 6.3.2 .T1 代阳性苗的筛选 | 第66页 |
| 6.3.3 .T2 代阳性苗的筛选 | 第66-67页 |
| 6.3.4 .转基因植株中目的基因表达量的测定 | 第67-68页 |
| 6.3.5 .超表达植株的黄萎病抗性鉴定 | 第68-69页 |
| 6.4 .结论与讨论 | 第69-71页 |
| 第七章 全文总结 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-81页 |
| 附录1 | 第81-82页 |
| 附录2 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 作者简历 | 第84页 |
