| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 英文缩略词 | 第11-12页 |
| 文献综述 绵羊肺炎支原体防控研究进展 | 第12-20页 |
| 试验研究 | 第20-58页 |
| 第一章 Mo贵州株药物敏感性分析 | 第20-29页 |
| 1 材料 | 第20-22页 |
| 1.1 菌株 | 第20页 |
| 1.2 试剂 | 第20-21页 |
| 1.3 试验药物 | 第21页 |
| 1.4 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2 方法 | 第22-23页 |
| 2.1 待检样本的制备 | 第22页 |
| 2.1.1 改良Hayflick培养基制备 | 第22页 |
| 2.1.2 菌液制备 | 第22页 |
| 2.2 药液的制备 | 第22-23页 |
| 2.2.1 抗菌药液制备 | 第22页 |
| 2.2.2 消毒药液制备 | 第22-23页 |
| 2.3 药敏试验 | 第23页 |
| 2.3.1 抗菌药敏感试验 | 第23页 |
| 2.3.2 消毒药敏感试验 | 第23页 |
| 3 结果 | 第23-27页 |
| 3.1 菌液MIC和MBC测定结果 | 第23-25页 |
| 3.2 抗菌药菌液OD450nm测定结果 | 第25-26页 |
| 3.3 消毒药菌液OD450nm测定结果 | 第26-27页 |
| 4 讨论 | 第27-29页 |
| 4.1 关于Mo的诊断技术 | 第27页 |
| 4.2 关于Mo的防控技术 | 第27-28页 |
| 4.3 关于环境消毒药的应用 | 第28-29页 |
| 第二章 Mo贵州株P30基因生物信息学分析 | 第29-43页 |
| 1 材料 | 第29-31页 |
| 1.1 菌株 | 第29页 |
| 1.2 试剂 | 第29-30页 |
| 1.2.1 培养基基础 | 第29页 |
| 1.2.2 DNA提取试剂 | 第29-30页 |
| 1.2.3 常规PCR试剂 | 第30页 |
| 1.2.4 分子克隆试剂 | 第30页 |
| 1.2.5 其他试剂 | 第30页 |
| 1.3 主要仪器 | 第30-31页 |
| 2 方法 | 第31-36页 |
| 2.1 Mo目的基因扩增 | 第31-32页 |
| 2.1.1 引物设计与合成 | 第31页 |
| 2.1.2 Mo菌株的复壮及基因组DNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.1.3 Mo目的基因PCR扩增 | 第32页 |
| 2.2 Mo目的基因克隆 | 第32-35页 |
| 2.2.1 Mo目的基因回收纯化 | 第32-33页 |
| 2.2.2 Mo目的基因与pMD19-T载体连接 | 第33页 |
| 2.2.3 重组质粒转化 | 第33-34页 |
| 2.2.4 阳性重组质粒筛选 | 第34-35页 |
| 2.3 MoP30序列测定与分析 | 第35-36页 |
| 2.3.1 MoP30基因变异性分析 | 第35页 |
| 2.3.2 MoP30同源性分析 | 第35页 |
| 2.3.3 MoP30进化树分析 | 第35-36页 |
| 2.3.4 MoP30氨基酸序列分析 | 第36页 |
| 3 结果 | 第36-41页 |
| 3.1 MoP30基因扩增结果 | 第36-37页 |
| 3.2 阳性重组质粒PCR及双酶切 | 第37页 |
| 3.3 MoP30变异性分析结果 | 第37-38页 |
| 3.4 MoP30同源性分析结果 | 第38-39页 |
| 3.5 MoP30基因进化树分析 | 第39-40页 |
| 3.6 MoP30氨基酸组成分析 | 第40页 |
| 3.7 MoP30二级结构预测 | 第40-41页 |
| 3.8 MoP30蛋白的抗原表位预测 | 第41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 4.1 关于Mo蛋白组学的研究 | 第41-42页 |
| 4.2 关于MoP30基因功能的研究 | 第42-43页 |
| 第三章 MoP30-Hsp70融合质粒构建及对小鼠细胞免疫应答影响 | 第43-58页 |
| 1 材料 | 第44页 |
| 1.1 载体 | 第44页 |
| 1.2 实验动物 | 第44页 |
| 1.3 试剂 | 第44页 |
| 1.4 主要仪器 | 第44页 |
| 2 方法 | 第44-49页 |
| 2.1 P30基因定点突变 | 第44-46页 |
| 2.1.1 定点突变引物的设计与合成 | 第44-45页 |
| 2.1.2 重叠延伸PCR第一循环 | 第45页 |
| 2.1.3 重叠延伸PCR第二循环 | 第45-46页 |
| 2.1.4 序列测定及分析 | 第46页 |
| 2.2 pcDNA3.1-P30的构建 | 第46-47页 |
| 2.2.1 目的基因获取 | 第46页 |
| 2.2.2 载体pcDNA3.1(+)双酶切 | 第46-47页 |
| 2.2.3 P30基因与pcDNA3.1-P30载体连接 | 第47页 |
| 2.2.4 重组质粒转化 | 第47页 |
| 2.2.5 重组质粒鉴定 | 第47页 |
| 2.3 pcDNA3.1-P30-Hsp70的构建 | 第47-49页 |
| 2.3.1 Hsp70基因获取 | 第47-48页 |
| 2.3.2 pcDNA3.1-P30载体双酶切 | 第48页 |
| 2.3.3 Hsp70基因与pcDNA3.1-P30载体连接 | 第48页 |
| 2.3.4 重组质粒转化 | 第48-49页 |
| 2.3.5 重组质粒鉴定 | 第49页 |
| 2.4 重组质粒对小鼠细胞因子分泌情况影响研究 | 第49页 |
| 2.4.1 无内毒素重组质粒大提取 | 第49页 |
| 2.4.2 动物免疫 | 第49页 |
| 3 结果 | 第49-55页 |
| 3.1 定点突变PCR结果 | 第49-50页 |
| 3.2 重组质粒PCR及双酶切鉴定 | 第50页 |
| 3.3 突变重组质粒序列比对结果 | 第50-51页 |
| 3.4 重组质粒pcDNA3.1-P30双酶切鉴定 | 第51页 |
| 3.5 重组质粒pcDNA3.1-P30-Hsp70双酶切鉴定 | 第51-52页 |
| 3.6 重组质粒对细胞因子分泌情况影响 | 第52-55页 |
| 3.6.1 小鼠血清中IL-4分泌水平检测 | 第52-53页 |
| 3.6.2 小鼠血清中IL-2分泌水平检测 | 第53-54页 |
| 3.6.3 小鼠血清中INF-γ分泌水平检测 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| 4.1 关于定点突变技术的应用 | 第55-56页 |
| 4.2 关于MoP30抗原性研究 | 第56页 |
| 4.3 关于Mo基因疫苗的研究 | 第56-58页 |
| 全文结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录一 参加科研项目 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
