| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第17-19页 |
| 第一章 引言 | 第19-39页 |
| 1.1 LEA蛋白研究进展 | 第19-32页 |
| 1.1.1 LEA蛋白概述 | 第19-22页 |
| 1.1.2 LEA蛋白的结构与特征 | 第22-24页 |
| 1.1.3 LEA蛋白的功能及其保护机理研究 | 第24-29页 |
| 1.1.4 LEA第3 家族蛋白研究进展 | 第29-32页 |
| 1.2 耐辐射异常球菌研究综述 | 第32-37页 |
| 1.2.1 耐辐射异常球菌的极端抗性 | 第33-36页 |
| 1.2.2 耐辐射异常球菌LEA蛋白研究进展 | 第36-37页 |
| 1.3 立题依据和研究意义 | 第37-39页 |
| 第二章 耐辐射异常球菌DohL蛋白结构特点及诱导表达调控分析 | 第39-57页 |
| 2.1 材料 | 第39-43页 |
| 2.1.1 菌株和载体 | 第39-40页 |
| 2.1.2 培养基及抗生素溶液配制 | 第40页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第40-41页 |
| 2.1.4 酶类、生化试剂及试剂盒 | 第41页 |
| 2.1.5 常用缓冲液及试剂的配制 | 第41-43页 |
| 2.2 方法 | 第43-47页 |
| 2.2.1 菌株培养条件 | 第43页 |
| 2.2.2 重组E.coli菌株构建 | 第43页 |
| 2.2.3 细菌RNA的提取及荧光定量PCR | 第43-44页 |
| 2.2.4 数字PCR(Digital droplet PCR) | 第44-45页 |
| 2.2.5 Western Blot检测 | 第45-46页 |
| 2.2.6凝胶阻滞实验 | 第46-47页 |
| 2.3 结果与分析 | 第47-56页 |
| 2.3.1 耐辐射异常球菌DR1172 蛋白生物信息学分析 | 第47-49页 |
| 2.3.2 DR1172 蛋白表达载体的构建 | 第49-50页 |
| 2.3.3 DR1172 诱导表达与纯化 | 第50页 |
| 2.3.4 DohL蛋白的二级结构特点 | 第50-52页 |
| 2.3.5 dohL基因诱导表达及调控 | 第52-56页 |
| 2.4 讨论 | 第56-57页 |
| 第三章 DohL突变株的表型分析及体内抗氧化酶活性测定 | 第57-73页 |
| 3.1 材料 | 第57-58页 |
| 3.1.1 菌株和载体 | 第57页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第57-58页 |
| 3.1.3 酶类、生化试剂及试剂盒 | 第58页 |
| 3.2 方法 | 第58-63页 |
| 3.2.1 引物设计及PCR反应 | 第58-60页 |
| 3.2.2 连接 | 第60页 |
| 3.2.3 E.coli热激转化 | 第60页 |
| 3.2.4 菌落PCR及酶切鉴定 | 第60页 |
| 3.2.5 耐辐射异常球菌线性DNA转化方法 | 第60-61页 |
| 3.2.6 ?dohL回补菌株和过表达菌株的构建 | 第61页 |
| 3.2.7 耐辐射异常球菌非生物胁迫实验 | 第61页 |
| 3.2.8 体内总抗氧化能力测定 | 第61-62页 |
| 3.2.9 体内抗氧化酶活性测定 | 第62页 |
| 3.2.10 体内乳酸脱氢酶(LDH)活性测定 | 第62-63页 |
| 3.3 结果与分析 | 第63-71页 |
| 3.3.1 突变株?dohL构建和验证 | 第63-65页 |
| 3.3.2 ?dohL回补菌株和dohL过表达菌株的构建和验证 | 第65-66页 |
| 3.3.3 dohL缺失后导致菌株氧化和干燥抗性下降 | 第66-68页 |
| 3.3.4 dohL基因缺失导致体内总抗氧化能力下降 | 第68-69页 |
| 3.3.5 dohL基因缺失导致体内抗氧化酶活性下降 | 第69页 |
| 3.3.6 dohL基因缺失导致体内乳酸脱氢酶酶活性下降 | 第69-70页 |
| 3.3.7 突变株?dohL对体内抗氧化酶和乳酸脱氢酶相关基因表达量的影响 | 第70-71页 |
| 3.4 讨论 | 第71-73页 |
| 第四章 DohL蛋白HD亲水结构域功能研究 | 第73-88页 |
| 4.1 材料和方法 | 第73-76页 |
| 4.1.1 实验菌株及质粒 | 第73-74页 |
| 4.1.2 常用缓冲液及试剂的配制 | 第74页 |
| 4.1.3 重组E.coli菌株构建 | 第74页 |
| 4.1.4 重组E.coli氧化胁迫冲击实验 | 第74-75页 |
| 4.1.5 微量热泳动仪(MST)实验 | 第75页 |
| 4.1.6 乳酸脱氢酶(LDH)体外酶活和聚合度测定 | 第75-76页 |
| 4.2 结果与分析 | 第76-86页 |
| 4.2.1 HD亲水结构域相关蛋白表达载体的构建 | 第76页 |
| 4.2.2 HD亲水结构域相关蛋白的诱导表达与纯化 | 第76-79页 |
| 4.2.3 氧化胁迫条件下HD亲水结构域功能分析 | 第79-80页 |
| 4.2.4 DohL和 HD能够与LDH相互作用 | 第80-83页 |
| 4.2.5 HD亲水结构域相关蛋白能够保护LDH酶活 | 第83-84页 |
| 4.2.6 HD亲水结构域相关蛋白能够减少LDH发生聚集 | 第84-86页 |
| 4.3 讨论 | 第86-88页 |
| 第五章 DohL蛋白核酸内切酶功能验证 | 第88-96页 |
| 5.1 材料和方法 | 第88-89页 |
| 5.1.1 实验菌株和质粒 | 第88页 |
| 5.1.2 常用缓冲液配制 | 第88页 |
| 5.1.3 脉冲场凝胶电泳 | 第88-89页 |
| 5.1.4 核酸内切酶测定 | 第89页 |
| 5.2 结果与分析 | 第89-95页 |
| 5.2.1 氧化处理后突变株的基因组不能恢复 | 第89-90页 |
| 5.2.2 DohL具有核酸内切酶功能 | 第90-95页 |
| 5.3 讨论 | 第95-96页 |
| 第六章 全文结论 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-111页 |
| 致谢 | 第111-113页 |
| 作者简历 | 第113页 |
