致谢 | 第5-6页 |
摘要 | 第6-10页 |
缩略词简表 (Abbreviations) | 第10-14页 |
第一章 绪论 | 第14-18页 |
1.1 间充质干细胞简介 | 第14页 |
1.2 MSCs对肿瘤细胞的调控作用 | 第14-15页 |
1.3 MSCs来源外泌体 | 第15-18页 |
第二章 MSCs能够抑制A549细胞增殖并促进凋亡同时诱导其发生EMT | 第18-30页 |
2.1 引言 | 第18页 |
2.2 实验材料 | 第18-19页 |
2.2.1 实验对象 | 第18页 |
2.2.2 实验仪器 | 第18-19页 |
2.2.3 实验试剂 | 第19页 |
2.3 实验方法 | 第19-25页 |
2.3.1 细胞培养 | 第19-20页 |
2.3.2 MSC-CM准备 | 第20页 |
2.3.3 CCK-8 法检测细胞活力 | 第20-21页 |
2.3.4 LDH法检测细胞毒性 | 第21页 |
2.3.5 Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡 | 第21-22页 |
2.3.6 细胞划痕实验检测细胞迁移 | 第22页 |
2.3.7 transwell实验检测细胞浸润 | 第22-23页 |
2.3.8 q PCR检测m RNA的表达水平 | 第23-24页 |
2.3.9 western blot检测蛋白表达水平 | 第24-25页 |
2.3.10 数据统计分析 | 第25页 |
2.4 实验结果与分析 | 第25-28页 |
2.4.1 MSC-CM抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞凋亡 | 第25-26页 |
2.4.2 MSC-CM能够诱导A549细胞发生EMT | 第26-27页 |
2.4.3 MSC-CM促进A549细胞的迁移及侵袭能力 | 第27-28页 |
2.5 讨论与小结 | 第28-30页 |
第三章 MSCs通过其来源外泌体诱导A549细胞发生EMT | 第30-39页 |
3.1 引言 | 第30页 |
3.2 实验材料 | 第30-31页 |
3.2.1 实验试剂 | 第30-31页 |
3.2.2 实验仪器 | 第31页 |
3.3 实验方法 | 第31-33页 |
3.3.1 GW4869处理的MSC-CM的收集 | 第31页 |
3.3.2 MSC-exo提取 | 第31-32页 |
3.3.3 外泌体蛋白浓度测定 | 第32页 |
3.3.4 外泌体标志性蛋白检测 | 第32页 |
3.3.5 外泌体透射电镜检测 | 第32页 |
3.3.6 外泌体荧光标记 | 第32-33页 |
3.4 实验结果与分析 | 第33-37页 |
3.4.1 GW4869对MSCs诱导的A549细胞的EMT的影响 | 第33-34页 |
3.4.2 GW4869对MSCs诱导的A549细胞迁移和侵袭能力的影响 | 第34-35页 |
3.4.3 MSC-exo的提取与鉴定 | 第35-36页 |
3.4.4 MSC-exo诱导A549细胞发生EMT | 第36-37页 |
3.4.5 MSC-exo促进A549细胞迁移及侵袭 | 第37页 |
3.5 讨论与小结 | 第37-39页 |
第四章 抑制TGF-β1 的表达逆转MSC-exo对肿瘤EMT的促进并增强对肿瘤生长的抑制作用 | 第39-54页 |
4.1 引言 | 第39页 |
4.2 实验材料 | 第39-40页 |
4.2.1 实验试剂 | 第39-40页 |
4.2.2 实验仪器 | 第40页 |
4.3 实验方法 | 第40-41页 |
4.3.1 TGF-β1 si RNA转染 | 第40页 |
4.3.2 si-TGF-β1 干扰的MSC-exo提取 | 第40-41页 |
4.3.3 细胞免疫荧光 | 第41页 |
4.3.4 数据统计分析 | 第41页 |
4.4 实验结果与分析 | 第41-51页 |
4.4.1 干扰TGF-β1 逆转MSC-CM对A549细胞EMT、迁移和侵袭的促进作用 | 第41-44页 |
4.4.2 干扰TGF-β1 增强MSC-CM对A549细胞生长的抑制作用 | 第44-45页 |
4.4.3 干扰TGF-β1 逆转MSC-exo对A549细胞EMT、迁移和侵袭的促进作用 | 第45-48页 |
4.4.4 干扰TGF-β1 增强MSC-exo对A549细胞生长的抑制作用 | 第48-49页 |
4.4.5 MSC-exo通过激活Smad2/Smad3信号通路诱导A549细胞发生EMT,干扰MSCs中TGF-β1 的表达逆转MSC-exo对Smad2/Smad3信号通路的活化 | 第49-50页 |
4.4.6 MSC-exo通过激活Smad非依赖性途径中的AKT、MAPK及NF-κB信号通路诱导A549细胞发生EMT,干扰MSCs中TGF-β1 的表达逆转MSC-exo对AKT、MAPK及NF-κB信号通路的活化 | 第50-51页 |
4.5 讨论与小结 | 第51-54页 |
第五章 总结与展望 | 第54-56页 |
5.1 总结 | 第54页 |
5.2 展望 | 第54-56页 |
参考文献 | 第56-68页 |
硕士期间发表的论文 | 第68-69页 |