| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第13-25页 |
| 1.1 细胞凋亡研究 | 第13-15页 |
| 1.2 可变剪切研究 | 第15-16页 |
| 1.3 可变剪切对于凋亡的影响 | 第16-17页 |
| 1.3.1 生存素 | 第16页 |
| 1.3.2 雌激素受体(ER) | 第16-17页 |
| 1.4 HNRNP A2/B1研究进展 | 第17-19页 |
| 1.5 PLK3研究进展 | 第19-20页 |
| 1.6 BIM研究进展 | 第20-23页 |
| 1.7 本论文的具体研究工作及其科学意义 | 第23-25页 |
| 第二章 实验方法 | 第25-41页 |
| 2.1 试剂、材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 试剂和材料 | 第25-26页 |
| 2.1.2 生物材料 | 第26页 |
| 2.1.3 常用试剂配制 | 第26-27页 |
| 2.1.3.1 细跑培养常用试剂 | 第26页 |
| 2.1.3.2 Western blot试剂￡制 | 第26-27页 |
| 2.1.3.3 细菌培养液及其相关试剂配制 | 第27页 |
| 2.1.3.4 基因克隆和表达试剂 | 第27页 |
| 2.2 PLK3基因扩增 | 第27-29页 |
| 2.3 质粒载体的制备 | 第29页 |
| 2.4 PCR产物与载体双酶切及连接 | 第29页 |
| 2.5 感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| 2.6 DNA转化感受态细胞 | 第30页 |
| 2.7 真核细胞转染 | 第30-31页 |
| 2.8 蛋白提取及western blotting | 第31-33页 |
| 2.8.1 蛋白提取过程 | 第31页 |
| 2.8.2 蛋白浓度测定 | 第31页 |
| 2.8.3 变性SDS聚丙烯酰胺电泳 | 第31-32页 |
| 2.8.4 转膜、封闭、杂交和显影 | 第32-33页 |
| 2.9 碱裂解法提取质粒DNA | 第33-34页 |
| 2.10 Quantitative RT-PCR | 第34-36页 |
| 2.10.1 RNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.10.2 Real-time PCR | 第35-36页 |
| 2.11 Reverse transcriptase-PCR | 第36页 |
| 2.12 Transwell实验 | 第36-37页 |
| 2.13 CCK8细胞增殖实验 | 第37页 |
| 2.14 流式细胞术检测凋亡实验 | 第37页 |
| 2.15 TUNEL组织细胞凋亡检测 | 第37-38页 |
| 2.16 RNA免疫沉淀步骤 | 第38-40页 |
| 2.17 统计学分析 | 第40-41页 |
| 第三章 实验结果 | 第41-54页 |
| 3.1 CRISPAR-CAS9构建稳定敲除HNRNP A2/B1的MCF-7以及MDA-MB-231乳腺癌细胞系 | 第41页 |
| 3.2 HNRNP A2/B1蛋白与PLK3基因前体mRNA分子有结合关系 | 第41-43页 |
| 3.3 HNRNP A2/B1正调控PLK3蛋白表达 | 第43-44页 |
| 3.3.1 敲除HNRNP A2/B1降低了PLK3蛋白表达 | 第43页 |
| 3.3.2 MCF-7乳腺癌细胞中回复表达hnRNP A2后PLK3表达升高 | 第43-44页 |
| 3.4 过表达PLK3蛋白对MCF-7细胞表型的影响 | 第44-47页 |
| 3.4.1 过表达PLK3抑制MCF-7细胞增殖 | 第45页 |
| 3.4.2 过表达PLK3抑制MCF-7细胞迁移 | 第45-46页 |
| 3.4.3 过表达PLK3促进MCF-7细胞凋亡 | 第46-47页 |
| 3.5 HNRNP A2/B1蛋白和BIM基因pre-mRNA结合并影响其可变剪切 | 第47-48页 |
| 3.6 HNRNP A2/B1蛋白敲除前后BIM基因主要变体mRNA表达水平 | 第48-49页 |
| 3.7 HNRNP A2/B1对乳腺癌MCF-7细胞移植瘤细胞凋亡影响 | 第49-50页 |
| 3.8 HNRNP A2/B1对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞凋亡的影响 | 第50-54页 |
| 3.8.1 敲除HNRNP A2/B1后促进MCF-7和MDA-MB-231细胞凋亡 | 第50-52页 |
| 3.8.2 过表达hnRNP A2抑制MCF-7乳腺癌细胞凋亡 | 第52-54页 |
| 第四章 讨论 | 第54-59页 |
| 4.1 HNRNP A2/B1调控PLK3蛋白表达 | 第54-55页 |
| 4.2 PLK3蛋白促进乳腺癌细胞凋亡 | 第55-56页 |
| 4.3 HNRNP A2/B1调节BIM可变剪切 | 第56-57页 |
| 4.4 HNRNP A2/B1参与乳腺癌细胞凋亡过程 | 第57-59页 |
| 结论 | 第59页 |
| 展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
