| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 嘧啶核苷酸(Pyrimidine nucleotide)概述 | 第12-14页 |
| 1.1.1 嘧啶合成途径概述 | 第12-14页 |
| 1.1.2 嘧啶核苷酸合成途径的生物学功能 | 第14页 |
| 1.2 二氢乳酸脱氢酶 | 第14-18页 |
| 1.3 研究展望 | 第18-20页 |
| 第二章 引言 | 第20-22页 |
| 2.1 研究背景及目的意义 | 第20页 |
| 2.2 研究目的和意义 | 第20-21页 |
| 2.3 研究主要内容 | 第21页 |
| 2.4 研究技术路线 | 第21-22页 |
| 第三章 家蚕二氢乳酸脱氢酶(BmDHODH)基因的克隆及信息分析 | 第22-44页 |
| 3.1 材料及试剂 | 第22-24页 |
| 3.1.1 主要材料 | 第22页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第22-23页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第23-24页 |
| 3.1.4 主要溶液配方 | 第24页 |
| 3.2 实验方法 | 第24-33页 |
| 3.2.0 引物设计 | 第25页 |
| 3.2.1 RNA提取 | 第25-26页 |
| 3.2.2 RNA的检测 | 第26页 |
| 3.2.3 cDNA第一条链的合成 | 第26-27页 |
| 3.2.4 cDNA的检测 | 第27页 |
| 3.2.5 基因的扩增 | 第27页 |
| 3.2.6 目的片段的回收 | 第27-28页 |
| 3.2.7 目的片段与载体的连接 | 第28页 |
| 3.2.8 转化 | 第28页 |
| 3.2.9 阳性克隆的筛选及验证 | 第28-29页 |
| 3.2.10 PCR鉴定 | 第29页 |
| 3.2.11 酶切鉴定 | 第29页 |
| 3.2.12 目的基因的测序 | 第29页 |
| 3.2.13 RACE模版的制备 | 第29-31页 |
| 3.2.14 BmDHODH基因3'RACE和5'RACE扩增 | 第31-33页 |
| 3.2.15 BmDHODH基因序列分析 | 第33页 |
| 3.2.16 BmDHODH基因在各组织以及时空表达谱分析 | 第33页 |
| 3.3 实验结果 | 第33-41页 |
| 3.3.1 BmDHODH基因的cDNA克隆 | 第33-34页 |
| 3.3.2 BmDHODH基因的RACE扩增 | 第34-35页 |
| 3.3.3 BmDHODH基因的cDNA的序列分析 | 第35-36页 |
| 3.3.4 BmDHODH蛋白的序列分析 | 第36-39页 |
| 3.3.5 BmDHODH基因组织芯片表达谱的分析 | 第39-40页 |
| 3.3.6 BmDHODH基因在家蚕各组织器官中的表达 | 第40页 |
| 3.3.7 BmDHODH基因的时空表达 | 第40-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-44页 |
| 第四章 来氟米特下调BmDHODH对家蚕胚胎细胞系BmE-SWU3的调控 | 第44-60页 |
| 4.1 材料及试剂 | 第44-47页 |
| 4.1.1 主要材料 | 第44页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第44-45页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第45-46页 |
| 4.1.4 主要溶液配方 | 第46-47页 |
| 4.2 实验方法 | 第47-53页 |
| 4.2.1 细胞培养与传代 | 第47-48页 |
| 4.2.2 MTT法测细胞生长曲线 | 第48-49页 |
| 4.2.3 BrdU标记荧光染色 | 第49-50页 |
| 4.2.4 Western-blot | 第50-51页 |
| 4.2.5 流式细胞仪检测 | 第51-52页 |
| 4.2.6 荧光定量PCR分析 | 第52-53页 |
| 4.2.7 统计学分析 | 第53页 |
| 4.3 结果与分析 | 第53-58页 |
| 4.3.1 来氟米特对BmE-SWU3细胞生长的影响 | 第53-54页 |
| 4.3.2 来氟米特处理后对BmE-SWU3细胞增殖的影响 | 第54-55页 |
| 4.3.3 来氟米特处理后BmE-SWU3细胞中BmDHODH的表达情况 | 第55-56页 |
| 4.3.4 来氟米特处理后对BmE-SWU3细胞的细胞周期的影响 | 第56-58页 |
| 4.4 讨论 | 第58-60页 |
| 第五章 dsRNA干涉BmDHODH对家蚕胚胎细胞系BmE-SWU3的影响 | 第60-70页 |
| 5.1 材料及试剂 | 第60页 |
| 5.1.1 主要材料 | 第60页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第60页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第60页 |
| 5.1.4 主要溶液配方 | 第60页 |
| 5.2 实验方法 | 第60-63页 |
| 5.2.1 细胞培养与传代 | 第60页 |
| 5.2.2 BrdU标记荧光染色 | 第60-61页 |
| 5.2.3 dsRNA的制备 | 第61-63页 |
| 5.2.4 Western-blot | 第63页 |
| 5.2.5 荧光定量PCR分析 | 第63页 |
| 5.2.6 统计学分析 | 第63页 |
| 5.2.7 统计学分析 | 第63页 |
| 5.3 结果与分析 | 第63-68页 |
| 5.3.1 dsRNA在BmE-SWU3细胞中介导的BmDHODH干涉 | 第63-64页 |
| 5.3.2 dsRNA下调BmDHODH对BmE-SWU3细胞生长增殖的影响 | 第64-65页 |
| 5.3.3 dsRNA下调BmDHODH对BmE-SWU3细胞增殖的影响 | 第65-66页 |
| 5.3.4 dsRNA下调BmDHODH后对BmE-SWU3细胞周期的影响 | 第66-68页 |
| 5.4 讨论 | 第68-70页 |
| 第六章 结论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 在读期间发表论文及参研课题情况 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
