| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词 | 第19-20页 |
| 1 绪论 | 第20-40页 |
| 1.1 肝癌的侵袭与转移 | 第20-26页 |
| 1.1.1 基质金属蛋白酶 | 第21-23页 |
| 1.1.2 纤溶酶原激活系统 | 第23-25页 |
| 1.1.3 上皮间充质转化相关分子 | 第25-26页 |
| 1.2 肿瘤微环境与肝癌 | 第26-31页 |
| 1.2.1 肿瘤微环境 | 第26-27页 |
| 1.2.2 肝癌微环境中的组成成分及其作用 | 第27-31页 |
| 1.3 模拟肿瘤微环境构建体外肿瘤细胞培养模型 | 第31-39页 |
| 1.3.1 二维模型 | 第31-32页 |
| 1.3.2 三维模型 | 第32-35页 |
| 1.3.3 脱细胞基质材料与肿瘤细胞三维培养 | 第35-37页 |
| 1.3.4 肝癌细胞三维体外培养 | 第37-39页 |
| 1.4 本文主要研究思路及研究内容 | 第39-40页 |
| 2 凝胶浴对海藻酸钙凝胶微球性能及肝癌细胞培养的影响 | 第40-60页 |
| 2.1 引言 | 第40-41页 |
| 2.2 实验部分 | 第41-49页 |
| 2.2.1 材料与仪器 | 第41-42页 |
| 2.2.2 不同凝胶浴制备海藻酸钙凝胶微球 | 第42-43页 |
| 2.2.3 微球的膨胀度测定 | 第43-44页 |
| 2.2.4 氨基荧光素标记凝胶微球的荧光强度测定 | 第44页 |
| 2.2.5 微球通透性的考察 | 第44页 |
| 2.2.6 微球内部结构的表征 | 第44-45页 |
| 2.2.7 微球机械强度的测定 | 第45页 |
| 2.2.8 人肝癌细胞的平面培养 | 第45页 |
| 2.2.9 包埋人肝癌细胞的微球的制备 | 第45页 |
| 2.2.10 微球中肝癌细胞的活力检测 | 第45页 |
| 2.2.11 微球中肝癌细胞的增殖 | 第45-46页 |
| 2.2.12 微球中肝癌细胞的细胞团大小及比例 | 第46页 |
| 2.2.13 微球中肝癌细胞的基因表达 | 第46-47页 |
| 2.2.14 微球中肝癌细胞的基质金属蛋白酶活性检测 | 第47-48页 |
| 2.2.15 微球包埋肝癌细胞的蛋白表达 | 第48页 |
| 2.2.16 包埋肝癌细胞微球的弹性模量测定 | 第48页 |
| 2.2.17 微球中钙离子含量的测定 | 第48-49页 |
| 2.2.18 统计学分析 | 第49页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第49-59页 |
| 2.3.1 凝胶浴对微球形态、结构及性能的影响 | 第49-53页 |
| 2.3.2 凝胶浴对微球中肝癌细胞增殖及活力的影响及机制 | 第53-58页 |
| 2.3.3 凝胶浴对微球中肝癌细胞侵袭转移潜能的影响 | 第58-59页 |
| 2.4 本章小结 | 第59-60页 |
| 3 用于复合凝胶微球支架构建的肝脏脱细胞基质溶液及粉末制备 | 第60-74页 |
| 3.1 引言 | 第60页 |
| 3.2 实验部分 | 第60-65页 |
| 3.2.1 材料与仪器 | 第60-61页 |
| 3.2.2 肝脏脱细胞基质的制备 | 第61-62页 |
| 3.2.3 肝脏脱细胞基质的HE染色 | 第62页 |
| 3.2.4 肝脏脱细胞基质DNA含量的测定 | 第62页 |
| 3.2.5 肝脏脱细胞基质的组织化学染色 | 第62-63页 |
| 3.2.6 肝脏脱细胞基质的免疫组织化学染色 | 第63页 |
| 3.2.7 肝脏脱细胞基质的蛋白组学检测 | 第63页 |
| 3.2.8 肝脏脱细胞基质的表面形貌 | 第63页 |
| 3.2.9 人肝癌细胞的平面培养 | 第63页 |
| 3.2.10 肝脏脱细胞基质片表面培养肝癌细胞 | 第63-64页 |
| 3.2.11 肝癌细胞活力的检测 | 第64页 |
| 3.2.12 肝脏脱细胞基质溶液的制备及其蛋白浓度测定 | 第64页 |
| 3.2.13 肝脏脱细胞基质溶液包被及其胶原成分验证 | 第64页 |
| 3.2.14 肝脏脱细胞基质溶液包被培养肝癌细胞 | 第64页 |
| 3.2.15 肝脏脱细胞基质粉末的制备 | 第64页 |
| 3.2.16 统计学分析 | 第64-65页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第65-72页 |
| 3.3.1 肝脏脱细胞基质的制备及评价 | 第65-70页 |
| 3.3.2 肝脏脱细胞基质溶液的制备及评价 | 第70-71页 |
| 3.3.3 肝脏脱细胞基质粉末的制备及表面形貌 | 第71-72页 |
| 3.4 本章小结 | 第72-74页 |
| 4 肝脏脱细胞基质溶液-海藻酸钙微球的制备及肝癌细胞培养 | 第74-87页 |
| 4.1 引言 | 第74页 |
| 4.2 实验部分 | 第74-77页 |
| 4.2.1 材料与仪器 | 第74-75页 |
| 4.2.2 人肝癌细胞的平面培养 | 第75页 |
| 4.2.3 肝脏脱细胞基质溶液的制备 | 第75页 |
| 4.2.4 DLMS包被培养肝癌细胞的增殖 | 第75-76页 |
| 4.2.5 DLMS包被培养肝癌细胞的基因表达 | 第76页 |
| 4.2.6 DLMS包被培养肝癌细胞的基质金属蛋白酶活性 | 第76页 |
| 4.2.7 肝脏脱细胞基质溶液-海藻酸钙凝胶(DLMS-ALG)微球的制备 | 第76页 |
| 4.2.8 微球膨胀度的测定 | 第76页 |
| 4.2.9 微球机械强度的测定 | 第76页 |
| 4.2.10 微球中胶原成分的验证 | 第76页 |
| 4.2.11 包埋肝癌细胞的DLMS-ALG微球的制备 | 第76-77页 |
| 4.2.12 微球中肝癌细胞的活力 | 第77页 |
| 4.2.13 微球中肝癌细胞的基因表达 | 第77页 |
| 4.2.14 微球中肝癌细胞的基质金属蛋白酶活性 | 第77页 |
| 4.2.15 统计学分析 | 第77页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第77-85页 |
| 4.3.1 DLMS包被培养对肝癌细胞增殖的影响 | 第77-78页 |
| 4.3.2 DLMS包被培养对肝癌细胞侵袭转移潜能的影响 | 第78-79页 |
| 4.3.3 制备条件对DLMS-ALG微球形态及性能的影响 | 第79-82页 |
| 4.3.4 DLMS-ALG微球包埋培养对肝癌细胞形态及活力的影响 | 第82-83页 |
| 4.3.5 DLMS-ALG微球包埋培养对肝癌细胞侵袭转移潜能的影响 | 第83-85页 |
| 4.4 本章小结 | 第85-87页 |
| 5 肝脏脱细胞基质粉末-海藻酸钙微球的制备及肝癌细胞培养 | 第87-103页 |
| 5.1 引言 | 第87页 |
| 5.2 实验部分 | 第87-91页 |
| 5.2.1 材料与仪器 | 第87-89页 |
| 5.2.2 肝脏脱细胞基质粉末的制备 | 第89页 |
| 5.2.3 肝脏脱细胞基质粉末-海藻酸钙(DLMP-ALG)微球的制备 | 第89页 |
| 5.2.4 微球的内部结构 | 第89页 |
| 5.2.5 微球的机械强度测定 | 第89-90页 |
| 5.2.6 微球的膨胀度测定 | 第90页 |
| 5.2.7 人肝癌细胞的平面培养 | 第90页 |
| 5.2.8 包埋人肝癌细胞的DLMP-ALG微球的制备 | 第90页 |
| 5.2.9 微球中肝癌细胞的活力检测 | 第90页 |
| 5.2.10 微球中肝癌细胞的增殖检测 | 第90页 |
| 5.2.11 微球的石蜡包埋与HE染色 | 第90页 |
| 5.2.12 微球中肝癌细胞的基因表达 | 第90页 |
| 5.2.13 微球中肝癌细胞的蛋白表达 | 第90-91页 |
| 5.2.14 微球中肝癌细胞的基质金属蛋白酶活性 | 第91页 |
| 5.2.15 统计学分析 | 第91页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第91-102页 |
| 5.3.1 制备条件对DLMP-ALG微球形态及性能的影响 | 第91-95页 |
| 5.3.2 DLMP-ALG微球包埋培养对肝癌细胞活力及增殖的影响 | 第95-97页 |
| 5.3.3 DLMP-ALG微球包埋培养对肝癌细胞的侵袭转移潜能的影响 | 第97-102页 |
| 5.4 本章小结 | 第102-103页 |
| 6 结论与展望 | 第103-106页 |
| 6.1 结论 | 第103页 |
| 6.2 创新点 | 第103-104页 |
| 6.3 展望 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-124页 |
| 附录A Real-time PCR引物序列 | 第124-125页 |
| 附录B 试剂配制方法 | 第125-127页 |
| 附录C 肝脏脱细胞基质蛋白组学检测(部分结果) | 第127-130页 |
| 作者简介 | 第130页 |
| 攻读博士学位期间科研项目及科研成果 | 第130-132页 |
| 致谢 | 第132页 |
