中文摘要 | 第6-8页 |
Abstract | 第8-9页 |
前言 | 第10-13页 |
材料与方法 | 第13-44页 |
1 实验材料 | 第13-17页 |
1.1 仪器设备 | 第13-14页 |
1.2 耗材 | 第14-17页 |
1.3 其他 | 第17页 |
2 实验方法 | 第17-44页 |
2.1 细胞培养及处理 | 第17-19页 |
2.2 胰岛分离和培养 | 第19-21页 |
2.3 RNA提取和相对定量分析 | 第21-24页 |
2.4 瞬时转染 | 第24-25页 |
2.5 TMT标记的定量蛋白质组学 | 第25-29页 |
2.6 细胞总蛋白质的提取及Western Blot检测 | 第29-34页 |
2.7 葡萄糖刺激的膜岛素分泌(Glucose stimulated insulin secretion,GSIS)功能和钾刺激的胰岛素分泌(Potassium stimulated insulin secretion,KSIS)功能实验和细胞内胰岛素含量抽提 | 第34-35页 |
2.8 CCK-8实验 | 第35-36页 |
2.9 Hoechst染色实验 | 第36页 |
2.10 DNA Ladder实验 | 第36页 |
2.11 胰岛免疫荧光和TUNEL实验 | 第36-38页 |
2.12 质粒构建 | 第38-42页 |
2.13 双荧光素酶报告基因实验 | 第42-43页 |
2.14 高脂喂养建立糖尿病模型及表型鉴定 | 第43页 |
2.15 统计学分析 | 第43-44页 |
结果 | 第44-66页 |
1、糖脂毒性导致胰岛及β细胞miR-299-5p表达水平下降 | 第44-46页 |
2、定量蛋白质组学结果的验证与分析 | 第46-50页 |
3、miR-299-5p调节β细胞功能 | 第50-53页 |
4、干扰miR-299-5p导致β细胞凋亡 | 第53-56页 |
5、miR-299-5p靶基因的寻找与鉴定 | 第56-61页 |
6、干扰Perp可部分逆转干扰miR-299-5p对β细胞造成的功能损伤及凋亡 | 第61-63页 |
7、Perp参与糖脂毒性诱导的β细胞功能障碍及凋亡 | 第63-66页 |
分析与讨论 | 第66-73页 |
小结 | 第73-74页 |
参考文献 | 第74-91页 |
文献综述 | 第91-113页 |
参考文献 | 第101-113页 |
附录 | 第113-117页 |
附录1 实时荧光定量PCR引物序列(5'-3') | 第113-114页 |
附录2 克隆引物序列(5'-3') | 第114-115页 |
附录3 缩略词表 | 第115-117页 |
攻读学位期间发表文章情况 | 第117-118页 |
致谢 | 第118页 |