| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 引言 | 第13-15页 |
| 第一章 聚乙烯亚胺构建的纳米基因载体的研究进展 | 第15-20页 |
| 1.1 PEI作为基因载体的机体障碍 | 第15-17页 |
| 1.1.1 转染效率与细胞毒性的矛盾 | 第15-16页 |
| 1.1.2 缺乏特异靶向性 | 第16页 |
| 1.1.3 复合物核递送障碍 | 第16页 |
| 1.1.4 体内转染效率较体外明显偏低 | 第16-17页 |
| 1.2 基于PEI的非病毒转基因载体构建策略 | 第17-19页 |
| 1.2.1 低分子量PEI的交联 | 第17页 |
| 1.2.2 连接靶向基团 | 第17-18页 |
| 1.2.3 细胞穿膜肽 | 第18页 |
| 1.2.4 核定位信号肽 | 第18-19页 |
| 1.3 结语 | 第19-20页 |
| 第二章 OTMCS-PEI-R18的合成与表征 | 第20-27页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.1 材料 | 第21页 |
| 2.1.2 仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-24页 |
| 2.2.1 三功能肽R18的构建 | 第22页 |
| 2.2.2 两亲性壳聚糖OTMCS的合成 | 第22页 |
| 2.2.3 OTMCS-PEI的合成 | 第22-23页 |
| 2.2.4 OTMCS-PEI-R18的合成 | 第23-24页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第24-26页 |
| 2.3.1 三功能肽R18的构建 | 第24-25页 |
| 2.3.2 OTMCS-PEI-R18的合成 | 第25-26页 |
| 2.4 结论 | 第26-27页 |
| 第三章 OTMCS-PEI-R18理化性质 | 第27-42页 |
| 3.1 试剂与仪器 | 第27-28页 |
| 3.1.1 试剂 | 第27页 |
| 3.1.2 仪器 | 第27-28页 |
| 3.2 实验方法 | 第28-33页 |
| 3.2.1 OTMCS-PEI-R18水解能力考查 | 第28页 |
| 3.2.2 OTMCS-PEI-R18缓冲能力的考查 | 第28页 |
| 3.2.3 OTMCS-PEI-R18/DNA复合物形态观察 | 第28-29页 |
| 3.2.4 OTMCS-PEI-R18/DNA复合物粒径和Zeta电位 | 第29页 |
| 3.2.5 琼脂糖凝胶电泳阻滞分析 | 第29-30页 |
| 3.2.6 抗DNase I降解的能力 | 第30-31页 |
| 3.2.7 抗血清能力 | 第31页 |
| 3.2.8 抗肝素钠解离能力 | 第31页 |
| 3.2.9 细胞毒性 | 第31-33页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第33-40页 |
| 3.3.1 OTMCS-PEI-R18水解能力考查 | 第33-34页 |
| 3.3.2 OTMCS-PEI-R18缓冲能力考查 | 第34页 |
| 3.3.3 OTMCS-PEI-R18/DNA形态观察 | 第34-35页 |
| 3.3.4 OTMCS-PEI-R18/DNA粒径和Zeta电位 | 第35-36页 |
| 3.3.5 凝胶电泳阻滞分析 | 第36-37页 |
| 3.3.6 抗DNA酶降解的能力 | 第37-38页 |
| 3.3.7 抗血清能力 | 第38页 |
| 3.3.8 抗肝素钠解离能力 | 第38-39页 |
| 3.3.9 细胞毒性 | 第39-40页 |
| 3.4 结论 | 第40-42页 |
| 第四章 OTMCS-PEI-R18的体内外转染 | 第42-53页 |
| 4.1 试剂与仪器 | 第42-43页 |
| 4.1.1 试剂 | 第42页 |
| 4.1.2 仪器 | 第42-43页 |
| 4.2 实验方法 | 第43-46页 |
| 4.2.1 质粒的抽提与纯化 | 第43-44页 |
| 4.2.2 细胞培养 | 第44页 |
| 4.2.3 报告基因体外转染 | 第44-45页 |
| 4.2.4 萤火虫荧光素酶基因的体内转染 | 第45-46页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第46-51页 |
| 4.3.1 抽提质粒的质量检测 | 第46页 |
| 4.3.2 绿色荧光蛋白报告基因体外转染 | 第46-48页 |
| 4.3.3 萤火虫荧光素酶报告基因细胞体外转染 | 第48-50页 |
| 4.3.4 萤火虫荧光素酶报告基因体内转染 | 第50-51页 |
| 4.4 结论 | 第51-53页 |
| 第五章 OTMCS-PEI-R18/DNA细胞递送的初步探究 | 第53-64页 |
| 5.1 材料与仪器 | 第53-54页 |
| 5.1.1 材料 | 第53-54页 |
| 5.1.2 仪器 | 第54页 |
| 5.2 实验方法 | 第54-56页 |
| 5.2.1 细胞培养 | 第54页 |
| 5.2.2 化学抑制剂的选择 | 第54-55页 |
| 5.2.3 化学抑制剂对转染效率的影响 | 第55-56页 |
| 5.2.4 复合物OTMCS-PEI-R18/DNA细胞内定位 | 第56页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第56-63页 |
| 5.3.1 内吞抑制剂对转染效率的影响 | 第56-59页 |
| 5.3.2 微丝和动力蛋白抑制剂对转染效率的影响 | 第59-60页 |
| 5.3.3 细胞分裂抑制剂对转染效率的影响 | 第60-62页 |
| 5.3.4 激光共聚焦复合物实时定位 | 第62-63页 |
| 5.4 结论 | 第63-64页 |
| 全文总结 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
