| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第8-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-27页 |
| 1 引言 | 第12页 |
| 2 纤维素酶的研究进展 | 第12-20页 |
| 2.1 纤维素和纤维素酶 | 第12页 |
| 2.2 纤维素酶的分类 | 第12-13页 |
| 2.3 纤维素酶来源 | 第13-15页 |
| 2.3.1 微生物纤维素酶 | 第13-14页 |
| 2.3.2 动物纤维素酶 | 第14页 |
| 2.3.3 植物纤维素酶 | 第14-15页 |
| 2.3.4 其它来源 | 第15页 |
| 2.4 纤维素酶的结构 | 第15-16页 |
| 2.5 纤维素酶的催化机理 | 第16-17页 |
| 2.6 影响纤维素酶活性的因素 | 第17页 |
| 2.6.1 温度和pH | 第17页 |
| 2.6.2 激活剂或抑制剂 | 第17页 |
| 2.6.3 底物组成 | 第17页 |
| 2.7 纤维素酶的应用 | 第17-19页 |
| 2.7.1 能源工业 | 第18页 |
| 2.7.2 饲料工业 | 第18页 |
| 2.7.3 洗涤剂工业 | 第18页 |
| 2.7.4 造纸工业 | 第18-19页 |
| 2.7.5 在环境保护中的应用 | 第19页 |
| 2.7.6 在中药成分提取中的应用 | 第19页 |
| 2.7.7 在食品工业中的应用 | 第19页 |
| 2.8 纤维素酶研究展望 | 第19-20页 |
| 3 巴斯德毕赤酵母表达系统的研究进展和前景展望 | 第20-24页 |
| 3.1 巴斯德毕赤酵母的特性 | 第20-21页 |
| 3.2 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第21-23页 |
| 3.2.1 宿主菌株 | 第21-22页 |
| 3.2.2 表达载体 | 第22-23页 |
| 3.2.3 巴斯德毕赤酵母表达系统的特点 | 第23页 |
| 3.2.4 外源基因在巴斯德毕赤酵母高效表达的特性 | 第23页 |
| 3.3 展望 | 第23-24页 |
| 4 米曲霉 | 第24-25页 |
| 4.1 米曲霉简介 | 第24页 |
| 4.2 米曲霉研究展望 | 第24-25页 |
| 5 研究目的、意义及内容 | 第25-27页 |
| 5.1 研究目的及意义 | 第25页 |
| 5.2 研究内容 | 第25-26页 |
| 5.3 研究流程 | 第26-27页 |
| 第二章 米曲霉葡聚糖酶（AoEGLAI）的合成及鉴定 | 第27-40页 |
| 1 材料与方法 | 第27-36页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第27-28页 |
| 1.1.1 菌株 | 第27页 |
| 1.1.2 载体 | 第27页 |
| 1.1.3 酶制剂 | 第27-28页 |
| 1.1.4 其他试剂 | 第28页 |
| 1.2 培养基 | 第28页 |
| 1.3 试验方法 | 第28-33页 |
| 1.3.1 密码子优化、引物设计与基因合成 | 第28-31页 |
| 1.3.2 PCR扩增 | 第31-33页 |
| 1.4 DNA回收 | 第33-34页 |
| 1.5 克隆与序列分析 | 第34-36页 |
| 1.5.1 克隆载体的构建 | 第34页 |
| 1.5.2 大肠杆菌EG60感受态的制备 | 第34-35页 |
| 1.5.3 感受态细胞的转化 | 第35页 |
| 1.5.4 质粒DNA的抽提 | 第35-36页 |
| 1.5.5 质粒的酶切鉴定 | 第36页 |
| 1.5.6 DNA序列测定 | 第36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-38页 |
| 2.1 AoEGLAI基因的合成 | 第36-38页 |
| 2.2 AoEGLAI基因序列的对比 | 第38页 |
| 3 讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 米曲霉葡聚糖酶在毕赤酵母的表达和纯化 | 第40-52页 |
| 1 材料与方法 | 第40-49页 |
| 1.1 实验材料 | 第40-42页 |
| 1.1.1 菌株、质粒及载体 | 第40页 |
| 1.1.2 化学试剂、酶制剂及仪器 | 第40-41页 |
| 1.1.3 培养基 | 第41-42页 |
| 1.2 实验方法 | 第42-49页 |
| 1.2.1 表达载体的构建 | 第42页 |
| 1.2.2 毕赤酵母电击转化Ao EGLAI基因 | 第42-43页 |
| 1.2.2.1 重组质粒的线性化 | 第42页 |
| 1.2.2.2 毕赤酵母感受态细胞的制备 | 第42-43页 |
| 1.2.2.3 毕赤酵母电击转化 | 第43页 |
| 1.2.3 筛选重组酵母转化子 | 第43-44页 |
| 1.2.4 重组酵母摇瓶发酵 | 第44-45页 |
| 1.2.5 AoEGLAI基因胞外表达及纯化 | 第45-46页 |
| 1.2.6 SDS-PAGE分析 | 第46-48页 |
| 1.2.6.1 溶液配制 | 第46-47页 |
| 1.2.6.2 分离胶的灌制 | 第47页 |
| 1.2.6.3 浓缩胶的灌制 | 第47-48页 |
| 1.2.6.4 样品制备、上样及电泳 | 第48页 |
| 1.2.6.5 染色与脱色 | 第48页 |
| 1.2.7 重组米曲霉葡聚糖酶蛋白含量测定 | 第48-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-51页 |
| 3.1 载体的构建 | 第49页 |
| 3.2 AoEGLAI基因的表达 | 第49-50页 |
| 3.3 SDS-PAGE及蛋白定量 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-52页 |
| 第四章 米曲霉内切葡聚糖酶的酶学特性的研究 | 第52-62页 |
| 1 材料与方法 | 第52-56页 |
| 1.1 试验材料 | 第52-53页 |
| 1.1.1 化学试剂及酶制剂 | 第52页 |
| 1.1.2 常用缓冲液配制方法 | 第52-53页 |
| 1.2 试验方法 | 第53-56页 |
| 1.2.1 葡聚糖酶酶活性测定及动力学研究 | 第53页 |
| 1.2.2 米曲霉葡聚糖酶的最适pH和pH稳定性 | 第53-54页 |
| 1.2.3 米曲霉葡聚糖酶的最适温度和温度稳定性 | 第54-55页 |
| 1.2.4 酶在有底物保护条件下的热稳定性研究 | 第55页 |
| 1.2.5 不同金属离子对酶活性的影响 | 第55页 |
| 1.2.6 蛋白酶对酶活性的影响 | 第55-56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-60页 |
| 2.1 最适pH和p H稳定性 | 第56-57页 |
| 2.2 最适温度和温度稳定性 | 第57-58页 |
| 2.3 酶在有底物保护条件下的热稳定性研究 | 第58页 |
| 2.4 不同金属离子对AoEGLAI活性的影响 | 第58-59页 |
| 2.5 蛋白酶对Ao EGLAI活性的影响 | 第59-60页 |
| 2.6 酶反应动力学参数 | 第60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| 本文结论与创新点 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 附录 常用培养基及溶液的配制 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71页 |