| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第10-18页 |
| 1.1 帕金森病 | 第10页 |
| 1.2 PINK1结构及细胞内定位 | 第10页 |
| 1.3 PINK1细胞保护功能 | 第10-12页 |
| 1.3.1 PINK1增强抗凋亡因子Bcl-2 活性 | 第11页 |
| 1.3.2 PINK1控制线粒体ROS的生成 | 第11-12页 |
| 1.3.3 PINK1增强HtrA2磷酸化 | 第12页 |
| 1.4 线粒体质量控制机制 | 第12-14页 |
| 1.4.1 线粒体自噬及PINK1-Parkin调控途径 | 第12-13页 |
| 1.4.2 线粒体动力学 | 第13-14页 |
| 1.5 β-syn及突触核蛋白病理学 | 第14-15页 |
| 1.6 自噬机理 | 第15-18页 |
| 2 材料和方法 | 第18-34页 |
| 2.1 PINK1野生型及突变载体构建 | 第18-25页 |
| 2.1.1 主要仪器与设备 | 第18页 |
| 2.1.2 试剂及配制方法 | 第18-20页 |
| 2.1.3 实验步骤 | 第20-25页 |
| 2.2 PINK1重组载体的表达与 β-synP123H稳定细胞系的建立 | 第25-30页 |
| 2.2.1 主要仪器与设备 | 第25页 |
| 2.2.2 常用试剂及配制 | 第25-27页 |
| 2.2.3 B103细胞单克隆形成能力评估： | 第27-28页 |
| 2.2.4 抗生素工作浓度摸索 | 第28页 |
| 2.2.5 转染、药杀 | 第28页 |
| 2.2.6 单克隆挑取（克隆环法） | 第28-29页 |
| 2.2.7 免疫印迹样品蛋白裂解 | 第29页 |
| 2.2.8 Western Blot免疫印迹 | 第29-30页 |
| 2.3 免疫荧光双标及细胞增殖、凋亡检测 | 第30-34页 |
| 2.3.1 主要仪器与设备 | 第30页 |
| 2.3.2 主要试剂及配制方法 | 第30-34页 |
| 3 结果与讨论 | 第34-50页 |
| 3.1 PINK1真核表达质粒的鉴定 | 第34-37页 |
| 3.1.1 双酶切，测序 | 第34-37页 |
| 3.2 B103稳定表达细胞系的建立 | 第37页 |
| 3.3 野生型PINK1及其突变体细胞定位特征和对细胞存活的影响 | 第37-40页 |
| 3.3.1 PINK1、TOM20免疫荧光双标 | 第37-39页 |
| 3.3.2 LDH细胞毒性及WST-1 细胞存活率检测 | 第39-40页 |
| 3.4 PINK1-Parkin参与线粒体保护作用研究 | 第40-43页 |
| 3.4.1 野生型PINK1及其突变体对细胞内Parkin定位影响 | 第40-42页 |
| 3.4.2 PINK1-Parkin对线粒体分裂融合动态平衡的影响 | 第42-43页 |
| 3.5 Parkin免疫荧光及线粒体荧光标记实验 | 第43-46页 |
| 3.5.1 Parkin突变聚集体降解途径分析 | 第43-44页 |
| 3.5.2 Parkin突变体对线粒体膜电位影响 | 第44-46页 |
| 3.6 Parkin参与突触核蛋白降解过程机制研究 | 第46-50页 |
| 3.6.1 Parkin对 β-syn P123H蛋白降解的影响 | 第46-47页 |
| 3.6.2 细胞凋亡检测 | 第47-50页 |
| 4 结论 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58-60页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第60-61页 |
