| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 文章综述 | 第10-22页 |
| 1.1 猪流行性腹泻病毒的起源 | 第10页 |
| 1.2 PED流行现状 | 第10-12页 |
| 1.2.1 国外PED流行现状 | 第10-11页 |
| 1.2.2 国内PED流行现状 | 第11页 |
| 1.2.3 湖南省PED流行现状 | 第11-12页 |
| 1.3 PED临床症状?病理变化及发病机制 | 第12-13页 |
| 1.3.1 临床症状 | 第12页 |
| 1.3.2 病理变化 | 第12-13页 |
| 1.3.3 发病机制 | 第13页 |
| 1.4 PED的免疫—肠道粘膜免疫 | 第13-14页 |
| 1.4.1 SIGA的生成方式 | 第14页 |
| 1.5 PEDV检测方法 | 第14-16页 |
| 1.5.1 RT-PCR | 第14页 |
| 1.5.2 荧光定量PCR | 第14-15页 |
| 1.5.3 中和试验 | 第15页 |
| 1.5.4 免疫荧光 | 第15页 |
| 1.5.5 胶体金免疫层析 | 第15页 |
| 1.5.6 酶联免疫吸附试验 | 第15-16页 |
| 1.6 PED及其相关疾病的防控 | 第16-18页 |
| 1.7 PED疫苗研究进展 | 第18-20页 |
| 1.7.1 PED灭活苗 | 第18-19页 |
| 1.7.2 PED弱毒苗 | 第19页 |
| 1.7.3 PED基因工程苗 | 第19-20页 |
| 1.8 强毒免疫—返饲 | 第20-21页 |
| 1.9 研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 荧光定量PCR检测方法的初步建立 | 第22-30页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.1 材料 | 第22页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 方法 | 第23-27页 |
| 2.2.1 标准质粒的构建 | 第23-26页 |
| 2.2.1.1 病料TOTALRNA的提取与返转录 | 第23-24页 |
| 2.2.1.2 CDNA的PCR扩增 | 第24页 |
| 2.2.1.3 PCR产物清洁回收 | 第24页 |
| 2.2.1.4 目的基因与T载体的连接 | 第24页 |
| 2.2.1.5 感受态细胞的制备与连接产物的转化 | 第24-25页 |
| 2.2.1.6 阳性转化子的鉴定及重组菌质粒的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.1.7 质粒的鉴定 | 第26页 |
| 2.2.2 荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第26页 |
| 2.2.3 荧光定量PCR特异性与重复性检测 | 第26-27页 |
| 2.3 结果 | 第27-29页 |
| 2.3.1 PEDV重组质粒的鉴定 | 第27页 |
| 2.3.2 荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第27-28页 |
| 2.3.3 Q-PCR特异性结果 | 第28-29页 |
| 2.3.4 Q-PCR重复试验结果 | 第29页 |
| 2.4 分析与讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 后备母猪感染PEDV后的排毒规律及抗体消长 | 第30-37页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第30页 |
| 3.1.1 临床样品 | 第30页 |
| 3.1.2 检测试剂与仪器 | 第30页 |
| 3.2 方法 | 第30-31页 |
| 3.2.1 返饲及腹泻样品采集方案 | 第30-31页 |
| 3.2.2 攻毒猪血清样品采集与检测 | 第31页 |
| 3.3 结果 | 第31-34页 |
| 3.3.1 攻毒猪腹泻期间收集的排泄物Q-PCR检测 | 第31-34页 |
| 3.3.2 6 头攻毒猪返饲前后血清抗体检测 | 第34页 |
| 3.4 分析与讨论 | 第34-37页 |
| 第四章 母猪接种PEDV自制灭活疫苗后的免疫评估分析 | 第37-51页 |
| 4.1 材料 | 第37-38页 |
| 4.1.1 制作灭活苗样本 | 第37页 |
| 4.1.2 血清及乳汁样品 | 第37页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第37-38页 |
| 4.2 PED灭活苗的制备方法 | 第38-39页 |
| 4.2.1 使用肠道与内容物制备组织灭活苗方法 | 第38-39页 |
| 4.2.2 粪便中病毒液的提取及灭活苗制备方法 | 第39页 |
| 4.2.3 灭活苗的荧光定量PCR检测 | 第39页 |
| 4.3 PED灭活苗的免疫跟踪 | 第39-41页 |
| 4.3.1 A猪场母猪两次PEDV免疫跟踪抗体检测 | 第40页 |
| 4.3.2 B猪场妊娠母猪PEDV免疫跟踪抗体检测 | 第40页 |
| 4.3.3 C猪场妊娠母猪PEDV免疫跟踪抗体检测 | 第40-41页 |
| 4.4 结果 | 第41-48页 |
| 4.4.1 对不同地方制备灭活苗病毒拷贝数的检测 | 第41页 |
| 4.4.2 猪场免疫前后的PED临床发病情况 | 第41-42页 |
| 4.4.3 A猪场母猪两次PEDV免疫跟踪抗体检测 | 第42-45页 |
| 4.4.4 B猪场妊娠母猪PEDV免疫跟踪抗体检测 | 第45-47页 |
| 4.4.5 C猪场妊娠母猪PEDV免疫跟踪抗体检测 | 第47-48页 |
| 4.5 分析与讨论 | 第48-51页 |
| 全文结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简历 | 第59页 |
