| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-33页 |
| 1 柑橘的冻害及其抗冻研究 | 第13-19页 |
| ·柑橘的寒害与冻害 | 第13-15页 |
| ·柑橘冻害机理及抗冻能力的获得 | 第15-16页 |
| ·柑橘抗冻过程中生理生化变化 | 第16-19页 |
| ·功能基因与抗寒性的研究 | 第19页 |
| 2 蛋白质水平研究基因的差异表达 | 第19-24页 |
| ·蛋白质组研究的历史背景 | 第19-20页 |
| ·大规模的蛋白质的分离技术 | 第20-22页 |
| ·生物质谱鉴定蛋白质技术 | 第22-23页 |
| ·蛋白质的信息处理 | 第23-24页 |
| 3 DNA结合蛋白 | 第24-26页 |
| ·DNA结合蛋白的概念 | 第24页 |
| ·DNA结合蛋白的组成 | 第24-26页 |
| ·DNA-蛋白质的相互作用 | 第26页 |
| 4 DNA结合蛋白的制备与分析 | 第26-30页 |
| ·DNA亲和层析柱 | 第27页 |
| ·DNA结合蛋白的纯化 | 第27-29页 |
| ·DNA结合蛋白的检测 | 第29-30页 |
| 5 研究的目的意义 | 第30-32页 |
| 6 技术路线 | 第32-33页 |
| 第二章 金柑抗冻实验模型的建立 | 第33-39页 |
| 1 材料与方法 | 第33-34页 |
| ·试验材料 | 第33页 |
| ·低温处理 | 第33页 |
| ·细胞损伤分析 | 第33-34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-37页 |
| ·金柑抗冻实验模型的冰冻处理时间 | 第34-35页 |
| ·金柑抗冻实验模型的冰冻处理温度 | 第35页 |
| ·低温胁迫对金柑叶片电解质渗出率的影响 | 第35-36页 |
| ·低温胁迫对柑桔叶片中丙二醛含量的影响 | 第36页 |
| ·抗冻实验模型的检验 | 第36-37页 |
| 3 讨论 | 第37-38页 |
| 4 小结 | 第38-39页 |
| 第三章 抗冻金柑叶片的生理生化分析 | 第39-55页 |
| 1 材料与方法 | 第39-43页 |
| ·试验材料 | 第39页 |
| ·冰冻处理 | 第39页 |
| ·外渗电导率的测定 | 第39-40页 |
| ·金柑叶片可溶性糖的测定 | 第40页 |
| ·金柑叶片可溶性蛋白的测定 | 第40页 |
| ·叶片脯氨酸含量测定 | 第40-41页 |
| ·金柑叶片MDA含量测定 | 第41页 |
| ·金柑叶片氧自由基含量测定 | 第41-42页 |
| ·金柑叶片抗氧化酶活性测定 | 第42-43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-49页 |
| ·金柑抗冻实验模型叶片外渗电导率 | 第43页 |
| ·金柑抗冻实验模型叶片叶可溶性糖含量 | 第43-44页 |
| ·金柑抗冻实验模型叶片中可溶性蛋白含量 | 第44-45页 |
| ·金柑抗冻实验模型叶片中脯氨酸含量 | 第45页 |
| ·金柑抗冻实验模型叶片中MDA含量 | 第45-46页 |
| ·金柑抗冻实验模型叶片中氧自由基含量 | 第46-47页 |
| ·金柑抗冻实验模型叶片中SOD酶活性 | 第47页 |
| ·金柑抗冻实验模型叶片中CAT酶活性 | 第47-48页 |
| ·金柑抗冻实验模型叶片中POD酶活性 | 第48-49页 |
| 3 讨论 | 第49-54页 |
| ·冰冻胁迫下指示细胞膜损伤的指标 | 第49页 |
| ·金柑抗冻实验模型叶片中渗透调节物质的含量 | 第49-50页 |
| ·金柑抗冻实验模型中抗氧化酶清除活性氧的数学模型 | 第50-54页 |
| 4 小结 | 第54-55页 |
| 第四章 金柑基因组DNA的固定化及双链化 | 第55-66页 |
| 1 材料与方法 | 第55-57页 |
| ·试验材料 | 第55页 |
| ·主要仪器 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-57页 |
| ·金柑基因组DNA的提取 | 第55-56页 |
| ·DNA的片段化 | 第56页 |
| ·微晶纤维素的预处理 | 第56页 |
| ·微晶纤维素上固定DNA | 第56页 |
| ·固定的DNA双链化 | 第56-57页 |
| ·二苯胺显色法测定DNA含量 | 第57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-60页 |
| ·金柑叶片基因组DNA提取及片段化 | 第57-58页 |
| ·DNA的固定化效果 | 第58-59页 |
| ·固定化温度对DNA固定化效果的影响 | 第59-60页 |
| ·固定化时间对DNA固定化效果的影响 | 第60页 |
| ·固定的DNA双链化效果 | 第60页 |
| 3 讨论 | 第60-65页 |
| ·DNA固定化及双链化的意义 | 第60-61页 |
| ·DNA固定化的原理及其过程 | 第61-62页 |
| ·固定的DNA双链化的原理及其过程 | 第62-64页 |
| ·DNA固定化及其双链化过程中的注意事项 | 第64页 |
| ·固定的DNA双链化效率与双链化DNA问收率 | 第64-65页 |
| 本章小结 | 第65-66页 |
| 第五章 应用DNA-纤维素层析分离金柑叶片DNA结合蛋白 | 第66-83页 |
| 1 材料与方法 | 第66-70页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第66-67页 |
| ·试材的处理 | 第67页 |
| ·实验方法 | 第67-70页 |
| ·金柑叶片蛋白质的提取 | 第67页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第67页 |
| ·DNA-纤维素层析分离DNA结合蛋白 | 第67页 |
| ·染色体重建及电镜观察 | 第67页 |
| ·蛋白质SDS-PAGE电泳 | 第67-68页 |
| ·蛋白质双向电泳 | 第68页 |
| ·凝胶染色 | 第68-69页 |
| ·凝胶照相 | 第69页 |
| ·蛋白质酶解 | 第69页 |
| ·LC-MS-MS分析 | 第69-70页 |
| 2 结果与分析 | 第70-80页 |
| ·金柑叶片蛋白质的提取 | 第70-71页 |
| ·DNA-纤维素层析制备DNA结合蛋白 | 第71-72页 |
| ·染色质重建 | 第72-73页 |
| ·SDS-PAGE分析DNA结合蛋白 | 第73-74页 |
| ·双向电泳分析DNA结合蛋白 | 第74-75页 |
| ·DNA结合蛋白质谱鉴定 | 第75-80页 |
| 3 讨论 | 第80-82页 |
| ·应用于DNA-纤维素层析的蛋白质样品的提取 | 第80页 |
| ·DNA-纤维素层析分离DNA结合蛋白 | 第80-81页 |
| ·DNA与DNA结合蛋白重建染色质 | 第81-82页 |
| ·一维SDS-PAGE电泳-质谱分离鉴定DNA结合蛋白 | 第82页 |
| 4 本章小结 | 第82-83页 |
| 第六章 金柑抗冻DNA结合蛋白的分析 | 第83-92页 |
| 1 材料与方法 | 第83-86页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第83页 |
| ·试材的处理 | 第83-84页 |
| ·实验材料 | 第83-84页 |
| ·冰冻处理 | 第84页 |
| ·实验方法 | 第84-86页 |
| ·金柑抗冻模型下叶片蛋白质的提取 | 第84页 |
| ·金柑叶片蛋白质含量测定 | 第84页 |
| ·亲和层析分离DNA结合蛋白 | 第84页 |
| ·蛋白质SDS-PAGE电泳 | 第84页 |
| ·凝胶染色 | 第84-85页 |
| ·凝胶照相 | 第85页 |
| ·蛋白质酶解 | 第85页 |
| ·LC-MS-MS分析 | 第85-86页 |
| 2 结果与分析 | 第86-89页 |
| ·金柑抗冻模型四种处理蛋白质的提取 | 第86-87页 |
| ·SDS-PAGE分析抗冻模型下金柑叶片DNA结合蛋白 | 第87-88页 |
| ·抗冻模型下金柑叶片表达的DNA结合蛋白 | 第88-89页 |
| 3 讨论 | 第89-90页 |
| 4 本章小结 | 第90-92页 |
| 结论及创新之处 | 第92-94页 |
| 下一步工作设想 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-101页 |
| 附录 | 第101-131页 |
| 附录1 常温栽培的金柑叶片中被鉴定的DNA结合蛋白 | 第102-104页 |
| 附录2 冷驯化栽培的金柑叶片中被鉴定的DNA结合蛋白 | 第104-107页 |
| 附录3 常温栽培的金柑遭遇冰冻叶片中被鉴定的DNA结合蛋白 | 第107-110页 |
| 附录4 冷驯化栽培的金柑遭遇冰冻叶片中被鉴定的DNA结合蛋白 | 第110-114页 |
| 附录5 冷驯化金柑叶片特异表达的DNA结合蛋白肽段 | 第114-118页 |
| 附录6 未冷驯化金柑叶片遭遇冰冻特异表达的DNA结合蛋白 | 第118-123页 |
| 附录7 冷驯化金柑叶片遭遇冰冻特异表达的DNA结合蛋白 | 第123-127页 |
| 附录8 部分肽段质谱图 | 第127-130页 |
| 附录9 缩略词表 | 第130-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
| 个人简历 | 第132-133页 |
