| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 缩列表 | 第11-12页 |
| 技术路线图 | 第12-17页 |
| 1 前言 | 第17-26页 |
| 1.1 研究背景 | 第17页 |
| 1.2 番茄的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.2.1 番茄抗冷性的研究 | 第17-18页 |
| 1.2.2 番茄抗旱性的研究 | 第18页 |
| 1.2.3 番茄耐盐性的研究 | 第18-19页 |
| 1.3 MYB转录因子的研究概况 | 第19-20页 |
| 1.4 GAMYB的研究概况 | 第20-24页 |
| 1.4.1 GAMYB在种子萌发中的作用 | 第20-21页 |
| 1.4.2 GAMYB在开花诱导中的作用 | 第21页 |
| 1.4.3 GAMYB在花药发育中的作用 | 第21-22页 |
| 1.4.4 GAMYB在激素信号途径中的作用 | 第22-23页 |
| 1.4.5 GAMYB互作蛋白 | 第23-24页 |
| 1.4.6 参与GAMYB调控的相关基因miR159 | 第24页 |
| 1.5 研究的内容以及选题的意义与目的 | 第24-26页 |
| 1.5.1 研究的内容 | 第24-25页 |
| 1.5.2 选题的意义 | 第25页 |
| 1.5.3 选题的目的 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-48页 |
| 2.1 材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第26页 |
| 2.1.2 菌种及载体 | 第26页 |
| 2.1.3 试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第27页 |
| 2.1.5 培养基的配方 | 第27-28页 |
| 2.2 方法 | 第28-48页 |
| 2.2.1 SlGAMYBL2进行生物信息学分析 | 第28-29页 |
| 2.2.2 SlGAMYBL2在番茄中组织表达模式分析 | 第29-32页 |
| 2.2.2.1 番茄材料的处理 | 第29页 |
| 2.2.2.2 番茄总RNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.2.3 电泳检测RNA | 第30页 |
| 2.2.2.4 反转录合成cDNA | 第30-31页 |
| 2.2.2.5 荧光定量PCR检测基因的表达水平 | 第31-32页 |
| 2.2.3 中间载体的构建 | 第32-37页 |
| 2.2.3.1 目的基因的PCR扩增 | 第32-33页 |
| 2.2.3.2 PCR产物回收 | 第33页 |
| 2.2.3.3 目标片段与pEASY-Blunt克隆载体的连接反应 | 第33-34页 |
| 2.2.3.4 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第34页 |
| 2.2.3.5 连接产物转化到大肠杆菌感受态细胞 | 第34页 |
| 2.2.3.6 菌落PCR对阳性转化子的检测 | 第34-35页 |
| 2.2.3.7 质粒的提取 | 第35-36页 |
| 2.2.3.8 质粒的酶切验证 | 第36-37页 |
| 2.2.4 SlGAMYBL2超表达载体的构建 | 第37-39页 |
| 2.2.4.1 克隆载体pEASY-SlGAMYBL2和表达载体P35S的双酶切 | 第37-38页 |
| 2.2.4.2 目的片段与表达载体的连接 | 第38页 |
| 2.2.4.3 连接产物的转化 | 第38-39页 |
| 2.2.4.4 菌落PCR对阳性转化子的检测 | 第39页 |
| 2.2.4.5 质粒的提取 | 第39页 |
| 2.2.4.6 阳性重组体的鉴定 | 第39页 |
| 2.2.5 遗传转化 | 第39-43页 |
| 2.2.5.1 根癌农杆菌感受态细胞EHA105的制备 | 第39-40页 |
| 2.2.5.2 重组质粒转化农杆菌(冻融法) | 第40页 |
| 2.2.5.3 农杆菌介导的烟草遗传转化 | 第40-42页 |
| 2.2.5.3.1 无菌苗的获得 | 第40页 |
| 2.2.5.3.2 农杆菌准备 | 第40-41页 |
| 2.2.5.3.3 叶片的侵染 | 第41页 |
| 2.2.5.3.4 抗性植株筛选 | 第41页 |
| 2.2.5.3.5 生根培养 | 第41-42页 |
| 2.2.5.4 转基因烟草植株的检测 | 第42-43页 |
| 2.2.5.4.1 转基因烟草植株的PCR筛选 | 第42页 |
| 2.2.5.4.2 转基因植株的GUS染色鉴定 | 第42-43页 |
| 2.2.5.4.3 转基因植株的表型分析 | 第43页 |
| 2.2.6 转基因株系的抗逆试验 | 第43-44页 |
| 2.2.6.1 转基因烟草种子的萌发实验 | 第43-44页 |
| 2.2.6.3 烟草幼苗非生物胁迫处理 | 第44页 |
| 2.2.7 生理指标测定 | 第44-48页 |
| 2.2.7.1 电导率的测定 | 第44-45页 |
| 2.2.7.2 保水性实验 | 第45页 |
| 2.2.7.3 酶液提取 | 第45页 |
| 2.2.7.4 SOD酶测定 | 第45-46页 |
| 2.2.7.7 过氧化氢酶(CAT)测定 | 第46-47页 |
| 2.2.7.8 过氧化物酶(POD)测定 | 第47页 |
| 2.2.7.9 丙二醛(MDA)含量测定 | 第47-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-67页 |
| 3.1 SlGAMYBL2的氨基酸序列对比和进化树分析 | 第48-49页 |
| 3.2 SlGAMYBL2基因在胁迫和外源激素处理下的表达分析 | 第49-50页 |
| 3.3 SlGAMYBL2超表达载体的构建 | 第50-52页 |
| 3.4 SlGAMYBL2超表达载体转化烟草 | 第52-53页 |
| 3.5 PCR验证转基因植株 | 第53页 |
| 3.6 转基因植株的GUS染色验证 | 第53-54页 |
| 3.7 表型的分析 | 第54-57页 |
| 3.8 种子萌发结果分析 | 第57-60页 |
| 3.9 非生物胁迫处理下烟草幼苗的根长分析 | 第60-61页 |
| 3.10 非生物胁迫下生理指标的分析 | 第61-67页 |
| 3.10.1 相对电导率 | 第61-62页 |
| 3.10.2 丙二醛(MDA)含量测定 | 第62页 |
| 3.10.3 保水性 | 第62-63页 |
| 3.10.4 超氧化物歧化酶(SOD)酶活性的测定 | 第63-64页 |
| 3.10.5 过氧化氢酶(CAT)活性的测定 | 第64-65页 |
| 3.10.6 过氧化物酶(POD)活性的测定 | 第65-67页 |
| 4 结论与讨论 | 第67-72页 |
| 4.1 结论 | 第67-68页 |
| 4.2 讨论 | 第68-71页 |
| 4.2.1 SlGAMYBL2基因提高了植株的抗逆性 | 第68页 |
| 4.2.2 SlGAMYBL2的氨基酸序列对比和进化树分析 | 第68页 |
| 4.2.3 超表达载体的构建 | 第68-69页 |
| 4.2.4 转基因植株的获得与表型的鉴定 | 第69页 |
| 4.2.5 超表达SlGAMYBL2提高了转基因烟草细胞膜稳定性 | 第69-70页 |
| 4.2.6 超表达SlGAMYBL2提高了转基因烟草抗氧化酶活性 | 第70-71页 |
| 4.3 后续工作的设想 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第84页 |
