| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-14页 |
| 1.1 稀有糖概述 | 第7-8页 |
| 1.1.1 D-阿洛酮糖简述 | 第7页 |
| 1.1.2 D-山梨糖简述 | 第7-8页 |
| 1.2 稀有糖生产关键酶 | 第8-11页 |
| 1.2.1 DHAP依赖型醛缩酶 | 第8-10页 |
| 1.2.2 甘油磷酸氧化酶 | 第10-11页 |
| 1.3 全细胞催化技术 | 第11-12页 |
| 1.4 迭代饱和突变(ISM) | 第12-13页 |
| 1.5 本论文研究意义和主要内容 | 第13-14页 |
| 1.5.1 本论文研究意义 | 第13页 |
| 1.5.2 本论文研究内容 | 第13-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-18页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第14-15页 |
| 2.1.2 酶、试剂和耗材 | 第15-16页 |
| 2.1.3 相关培养基、溶液配制 | 第16-18页 |
| 2.1.4 主要设备和仪器 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-28页 |
| 2.2.1 大肠杆菌电转感受态制备 | 第18-19页 |
| 2.2.2 大肠杆菌质粒电转化 | 第19页 |
| 2.2.3 重组抗性表达载体以及基因突变载体的构建 | 第19-21页 |
| 2.2.4 DHAP依赖型醛缩酶表达以及全细胞制备 | 第21-22页 |
| 2.2.5 RhaD突变体筛选 | 第22-25页 |
| 2.2.6 RhaD野生型以及突变体醛缩酶的表达和纯化 | 第25-26页 |
| 2.2.7 醛缩酶相关反应体系的构建 | 第26页 |
| 2.2.8 醛缩酶相关反应的酶活检测 | 第26页 |
| 2.2.9 醛缩酶全细胞反应中条件优化 | 第26-28页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第28-48页 |
| 3.1 全细胞反应体系在合成稀有糖中的应用 | 第28-39页 |
| 3.1.1 全细胞反应体系中重组质粒的构建 | 第28-29页 |
| 3.1.2 醛缩酶和甘油磷酸氧化酶的表达 | 第29-30页 |
| 3.1.3 全细胞转化条件优化 | 第30-33页 |
| 3.1.4 全细胞反应体系催化D-甘油醛 | 第33-36页 |
| 3.1.5 全细胞反应体系催化L-甘油醛 | 第36-39页 |
| 3.2 RhaD蛋白分子改造定向合成单一产物 | 第39-43页 |
| 3.2.1 RhaD蛋白质分子定向改造中重组质粒的构建 | 第39-40页 |
| 3.2.2 RhaD半理性改造筛选结果 | 第40-43页 |
| 3.3 半理性分子改造RhaD全细胞反应生产稀有糖 | 第43-48页 |
| 3.3.1 RhaD全细胞反应定向合成D-阿洛酮糖 | 第43-45页 |
| 3.3.2 RhaD全细胞反应定向合成D-山梨糖 | 第45-48页 |
| 主要结论与展望 | 第48-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的文章 | 第56页 |
