| List of Acronyms and Abbreviations | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 摘要 | 第13-14页 |
| CHAPTER ONE | 第14-41页 |
| 1.0 INTRODUCTION | 第14-17页 |
| 1.1 Citrus production | 第17页 |
| 1.2 Citrus and Tristeza Disease | 第17-18页 |
| 1.3 Citrus tristeza virus | 第18-23页 |
| 1.3.1 Citrus tristeza virus host range and symptoms | 第18-21页 |
| 1.3.2 Transmission | 第21-23页 |
| 1.4 Taxonomic classification and genome organization of Citrus tristeza virus | 第23-26页 |
| 1.4.1 Classification of CTV | 第23-24页 |
| 1.4.2 Genome organization of CTV | 第24-26页 |
| 1.5 Characterization of Citrus tristeza virus | 第26-31页 |
| 1.5.1 Biological indexing on indicator plant | 第26-27页 |
| 1.5.2 Serological based indexing | 第27-28页 |
| 1.5.3 Molecular based indexing | 第28-31页 |
| 1.6 CTV expressed proteins | 第31-33页 |
| 1.7 Control Strategies | 第33-35页 |
| 1.8 Protein-protein interaction | 第35-38页 |
| 1.8.1 Methods for studying Protein-protein interaction | 第35-36页 |
| 1.8.2 Yeast-Two-Hybrid assay | 第36页 |
| 1.8.3 Bimolecular Fluorescence Complementation | 第36-37页 |
| 1.8.4 Glutathione S-transferase pull down | 第37-38页 |
| 1.9 Trends in CTV protein-protein interaction studied | 第38-40页 |
| 1.10 Objectives | 第40-41页 |
| CHAPTER TWO | 第41-68页 |
| 2.0 Protein-protein interaction often CTVORF by Y2H | 第41页 |
| 2.1 MATERIALS AND METHODS | 第41-53页 |
| 2.1.1 Plant materials | 第41页 |
| 2.1.2 Total RNA Extraction | 第41-43页 |
| 2.1.3 Primers designing | 第43-44页 |
| 2.1.4 cDNA synthesis | 第44-45页 |
| 2.1.5 Polymerase chain reaction | 第45页 |
| 2.1.6 Gel Electrophoresis | 第45-46页 |
| 2.1.7 DNA-Gel Extraction and DNA ligation | 第46-47页 |
| 2.1.8 Cloning and transformation | 第47-48页 |
| 2.1.9 Sequence analysis and Phylogeny | 第48-49页 |
| 2.1.10 Recombinant plasmid extraction from bacteria cell | 第49页 |
| 2.1.11 Yeast two-hybrid plasmids construction | 第49-50页 |
| 2.1.12 Yeast Two-Hybrid Assay | 第50-53页 |
| 2.2 RESULTS | 第53-66页 |
| 2.2.1 Total RNA extraction from infected indicator plants | 第53-54页 |
| 2.2.2 RT-PCR for CTV ORFs | 第54页 |
| 2.2.3 Analysis of nucleotide and amino acid sequences for CTV 10 ORF | 第54-60页 |
| 2.2.4 Cloning into pGBKT7 and pGADT7 vectors | 第60-61页 |
| 2.2.5 Auto activation test | 第61页 |
| 2.2.6 Protein-protein interaction of CTV ten ORFs | 第61-62页 |
| 2.2.7 Interaction among CP, p20 and CPm from four CTV isolates | 第62-66页 |
| 2.3 DISCUSSION | 第66-68页 |
| CHAPTER THREE | 第68-87页 |
| 3.0 Mapping of CP and p20 domains mediating self-interaction | 第68页 |
| 3.1 Introduction | 第68页 |
| 3.2 Materials and methods | 第68-78页 |
| 3.2.1 RNA extraction and RT-PCR | 第68页 |
| 3.2.2 Alignment of CTV CP and p20 deduced and reported amino acid sequences | 第68-70页 |
| 3.2.3 Truncation, primer designed for CP and p20 | 第70-72页 |
| 3.2.4 Construction of plasmids for Y2H assay with ACPs and Ap20 | 第72页 |
| 3.2.5 Colony-lift filter assay | 第72页 |
| 3.2.6 β-galactosidase activity with ONPG | 第72-73页 |
| 3.2.7 Glutathione S-Transferase Pull-Down Assay | 第73-78页 |
| 3.3 Results | 第78-86页 |
| 3.3.1 Amplified truncates of p20 and CP genes | 第78页 |
| 3.3.2 Enzymatic confirmation of recombinant plasmids | 第78页 |
| 3.3.3 Amino acid sequence alignment and domain architect of CP and p20 proteins | 第78-80页 |
| 3.3.4 Mapping of CP and p20 domains mediating self-interaction | 第80-84页 |
| 3.3.5 GST-pull down | 第84-86页 |
| 3.4 DISCUSSION | 第86-87页 |
| CHAPTER FOUR | 第87-105页 |
| 4.0 BIMOLECULAR FLUORESCENCE COMPLEMENTATION | 第87页 |
| 4.1 INTRODUCTION | 第87页 |
| 4.2 Materials and methods | 第87-90页 |
| 4.2.1 Plant materials and virus isolates | 第87页 |
| 4.2.2 Plasmid construction | 第87-88页 |
| 4.2.3 Competent Agrobacterium tumefaciens (GV3101) protocol | 第88-89页 |
| 4.2.4 Competent GV3101 cells transformation | 第89页 |
| 4.2.5 Preparation of Agrobacterium culture for Nicotiana benthamiana infiltration | 第89-90页 |
| 4.2.6 Microscopic Observation | 第90页 |
| 4.3 Results | 第90-103页 |
| 4.3.1 Plasmids construct for BiFC experiment | 第91页 |
| 4.3.2 Agroinfiltration and CP, p20 and S4-CPm/N4-CP interactions confirmed by BiFC | 第91-94页 |
| 4.3.3 RT-PCR detection CTV-CPm, CP and p20 from N. benthamiana leaf | 第94页 |
| 4.3.4 Secondary structure prediction of CTV CP-S4 and N4 isolates | 第94-96页 |
| 4.3.5 Secondary structure prediction of CTV CPm-S4 and N4 isolates | 第96-97页 |
| 4.3.6 3D Protein structure for CTV-CP and CPm | 第97-98页 |
| 4.3.7 Analyzed binding site and disorder of CTV-CP and CPm protein sequences | 第98页 |
| 4.3.8 Secondary structure composition and solvent accessibility | 第98-102页 |
| 4.3.9 Analyzed Amino acid composition for CP and CPm | 第102-103页 |
| 4.4 Discussion | 第103-105页 |
| CHAPTER FIVE | 第105-109页 |
| 5.0 CONCLUTION AND RECOMMENDATIONS | 第105页 |
| 5.1 CONCLUTION | 第105-108页 |
| 5.2 RECOMMENDATIONS | 第108-109页 |
| REFERENCES | 第109-126页 |
| Appendix Ⅰ:Preparation of solutions and buffers | 第126-129页 |
| Appendix Ⅱ:Principles of protein-protein study technique | 第129-131页 |
| APENDIX Ⅲ:CTV isolate with complete genome published | 第131-134页 |
| Appendix Ⅳ:Secondary structure CTV amino acids | 第134-136页 |
| Appendix Ⅴ:Cloning vectors | 第136-140页 |
| Appendix Ⅵ:Yeast two-hybrid results | 第140-141页 |
| ACKNOWLEDGMENTS | 第141-142页 |
| PUBLICATION | 第142页 |
