| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 精氨酸甲基化和精氨酸甲基转移酶 | 第12-40页 |
| 1.1 引言 | 第12页 |
| 1.2 甲基化的精氨酸 | 第12页 |
| 1.3 精氨酸甲基转移酶 | 第12-19页 |
| 1.3.1 PRMT1 | 第13-14页 |
| 1.3.2 PRMT2 | 第14页 |
| 1.3.3 PRMT3 | 第14-15页 |
| 1.3.4 PRMT4 | 第15页 |
| 1.3.5 PRMT5 | 第15-16页 |
| 1.3.6 PRMT6 | 第16页 |
| 1.3.7 PRMT7 | 第16-18页 |
| 1.3.8 PRMT8 | 第18-19页 |
| 1.3.9 PRMT9 | 第19页 |
| 1.4 PRMTs的结构研究 | 第19-20页 |
| 1.5 精氨酸甲基化的功能研究 | 第20-23页 |
| 1.5.1 转录辅助激活因子 | 第20-21页 |
| 1.5.2 转录辅助抑制因子 | 第21页 |
| 1.5.3 mRNA剪接 | 第21-22页 |
| 1.5.4 DNA修复 | 第22页 |
| 1.5.5 细胞核/细胞质的穿梭 | 第22-23页 |
| 1.6 组蛋白精氨酸甲基化 | 第23-26页 |
| 1.6.1 H2AR3me2a和H4R3me2a | 第23页 |
| 1.6.2 H4R3me2s | 第23-24页 |
| 1.6.3 H2AR29me2a | 第24页 |
| 1.6.4 H3R2me2a | 第24页 |
| 1.6.5 H3R2me2s | 第24-25页 |
| 1.6.6 H3R8me2s | 第25页 |
| 1.6.7 H3R8me2a | 第25页 |
| 1.6.8 H3R17me2a | 第25页 |
| 1.6.9 H3R26me2a | 第25页 |
| 1.6.10 H3R42me2a | 第25-26页 |
| 1.7 精氨酸的去甲基化 | 第26-27页 |
| 1.8 精氨酸去亚胺基化 | 第27-28页 |
| 1.9 甲基化精氨酸的效应分子 | 第28-31页 |
| 参考文献 | 第31-40页 |
| 第2章 材料与方法 | 第40-58页 |
| 2.1 基因克隆及蛋白表达 | 第40-50页 |
| 2.1.1 边界的选择及引物设计 | 第40-45页 |
| 2.1.2 琼脂糖凝胶电泳分离纯化目的DNA片段 | 第45页 |
| 2.1.3 用EZNA DNA Isolation System试剂盒回收目的DNA片段 | 第45-46页 |
| 2.1.4 质粒的提取 | 第46-47页 |
| 2.1.5 质粒和目的DNA的双酶切 | 第47页 |
| 2.1.6 目的DNA链接到质粒 | 第47页 |
| 2.1.7 连接产物转化到大肠杆菌 | 第47页 |
| 2.1.9 IPTG诱导目标蛋白表达 | 第47-48页 |
| 2.1.10 目标蛋白的螯合Ni~(2+)亲和纯化 | 第48页 |
| 2.1.11 l TEV蛋白酶切除目标蛋白的His-tag | 第48页 |
| 2.1.12 目标蛋白的阴离子交换层析 | 第48-49页 |
| 2.1.13 目标蛋白的凝胶过滤层析 | 第49页 |
| 2.1.14 SDS PAGE电泳 | 第49-50页 |
| 2.2 体外甲基化酶活实验 | 第50-52页 |
| 2.2.1 荧光显影 | 第50-51页 |
| 2.2.2 免疫印迹 | 第51页 |
| 2.2.3 酶活动力学 | 第51-52页 |
| 2.2.4 基质辅助激光解吸附质谱 | 第52页 |
| 2.3 等温滴定量热 | 第52-54页 |
| 2.4 晶体筛选和优化 | 第54-55页 |
| 2.5 硒代蛋白质的纯化和结晶 | 第55页 |
| 2.6 X-射线衍射数据的收集 | 第55-56页 |
| 2.7 数据处理和结构修正 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-58页 |
| 第3章 锥虫PRMT6的结构与酶活研究 | 第58-76页 |
| 3.1 引言 | 第58页 |
| 3.2 实验结果 | 第58-74页 |
| 3.2.1 TbPRMT6的晶体结构 | 第58-60页 |
| 3.2.2 AdoHcy的识别 | 第60-62页 |
| 3.2.3 AdoHcy结合之后的活性位点的结构变化 | 第62-66页 |
| 3.2.4 TbPRMT6形成二聚体 | 第66页 |
| 3.2.5 TbPRMT6和其他PRMTs的结构比较 | 第66-71页 |
| 3.2.6 在体外实验中,TbPRMT6不能甲基化锥虫组蛋白小肽 | 第71-74页 |
| 参考文献 | 第74-76页 |
| 第4章 锥虫PRMT7的结构与酶活研究 | 第76-98页 |
| 4.1 引言 | 第76页 |
| 4.2 实验结果 | 第76-90页 |
| 4.2.1 TbPRMT7是第Ⅲ类PRMT,只催化生成MMA | 第76-78页 |
| 4.2.2 TbPRMT7的晶体结构 | 第78-80页 |
| 4.2.3 与第Ⅰ类和第Ⅱ类PRMT的结构比较 | 第80-82页 |
| 4.2.4 TbPRMT7形成二聚体 | 第82-85页 |
| 4.2.5 AdoHcy的识别 | 第85页 |
| 4.2.6 底物小肽的结合 | 第85-86页 |
| 4.2.7 底物结合引起TbPRMT7活性口袋从打开到关闭的构象转换 | 第86-88页 |
| 4.2.8 TbPRMT7的活性口袋相对较小 | 第88-90页 |
| 4.3 讨论 | 第90-95页 |
| 4.3.1 TbPRMT7催化的结构机理 | 第90-92页 |
| 4.3.2 TbPRMT7单甲基化活性的结构决定因子 | 第92-93页 |
| 4.3.3 哺乳动物的PRMT7 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-98页 |
| 致谢 | 第98-100页 |
| 在读期间发表的学术论文与参加的学术会议 | 第100页 |
