| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 前言 | 第7-13页 |
| 材料与方法 | 第13页 |
| 1. 实验材料 | 第13-20页 |
| 1.1 实验动物 | 第13页 |
| 1.2 菌株和细胞系 | 第13页 |
| 1.2.1 细菌菌株 | 第13页 |
| 1.2.2 细胞系 | 第13页 |
| 1.3 质粒载体 | 第13-17页 |
| 1.4 工具酶以及分子量标准 | 第17页 |
| 1.5 试剂盒 | 第17-18页 |
| 1.6 化学试剂(按试剂公司分类) | 第18页 |
| 1.7 主要仪器及设备 | 第18-19页 |
| 1.8 分析软件 | 第19页 |
| 1.9 实验所用引物 | 第19-20页 |
| 2. 实验方法 | 第20-49页 |
| 2.1 质粒载体的构建 | 第20-30页 |
| 2.1.1 PCR法扩增目的片段 | 第20-21页 |
| 2.1.2 PCR点突变KLF9在PGC-1α基因启动子上的结合位点 | 第21-22页 |
| 2.1.3 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第22-23页 |
| 2.1.4 DNA凝胶回收(Axygen试剂盒) | 第23-24页 |
| 2.1.5 DNA及载体的酶切 | 第24页 |
| 2.1.6 片段与载体的连接 | 第24-25页 |
| 2.1.7 连接产物的转化 | 第25-26页 |
| 2.1.8 阳性克隆的筛选 | 第26-29页 |
| 2.1.9 质粒DNA的大量制备 | 第29-30页 |
| 2.2 细胞培养 | 第30-32页 |
| 2.2.1 细胞培养条件 | 第30页 |
| 2.2.2 细胞的复苏 | 第30页 |
| 2.2.3 细胞的传代培养 | 第30页 |
| 2.2.4 细胞的冻存 | 第30页 |
| 2.2.5 细胞的计数 | 第30-32页 |
| 2.3 细胞的瞬时转染 | 第32-33页 |
| 2.4 双荧光素酶报告实验测定启动子活性 | 第33-35页 |
| 2.5 总RNA提取及cDNA合成 | 第35-37页 |
| 2.5.1 总RNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.5.2 总RNA逆转录合成cDNA | 第36-37页 |
| 2.6 Real-Time PCR实验 | 第37页 |
| 2.7 细胞蛋白质的分离提取 | 第37-39页 |
| 2.7.1 溶液配制 | 第38页 |
| 2.7.2 蛋白样品的制备 | 第38-39页 |
| 2.7.3 BCA法测定蛋白质样品的浓度 | 第39页 |
| 2.8 Western blot | 第39-45页 |
| 2.8.1 试剂配制 | 第39-42页 |
| 2.8.2 SDS-聚丙烯酸胺凝胶电泳(SDS—PAGE) | 第42-43页 |
| 2.8.3 转膜 | 第43-44页 |
| 2.8.4 封闭及杂交 | 第44页 |
| 2.8.5 发光鉴定 | 第44-45页 |
| 2.9 重组腺病毒的构建与包装 | 第45-47页 |
| 2.10 小鼠肝原代细胞的分离以及培养 | 第47-48页 |
| 2.10.1 实验物品 | 第47页 |
| 2.10.2 溶液 | 第47页 |
| 2.10.3 步骤 | 第47-48页 |
| 2.11 统计分析 | 第48-49页 |
| 实验流程 | 第49-50页 |
| 实验结果 | 第50-56页 |
| 1. H_2O_2刺激小鼠的原代肝脏细胞抗ROS基因的表达 | 第50-51页 |
| 2. KLF9可以激活小鼠PGC-1α基因的启动子 | 第51-52页 |
| 3. KLF9基因过表达腺病毒的包装及原代肝细胞水平验证 | 第52-53页 |
| 4. 过表达KLF9激活小鼠原代肝脏细胞抗ROS基因的表达 | 第53页 |
| 5. 干扰KLF9减弱小鼠原代肝脏细胞抗ROS基因的表达 | 第53-54页 |
| 6. KLF9通过PGC-1α来调节抗ROS基因的表达 | 第54-56页 |
| 讨论 | 第56-58页 |
| 小结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 综述 | 第65-82页 |
| 参考文献 | 第78-82页 |
| 附录 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
