| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 无机焦磷酸 | 第10-14页 |
| 1.1.1 无机焦磷酸酶家族的共性与差异 | 第10-11页 |
| 1.1.2 可溶性无机焦磷酸酶的结构和功能 | 第11-12页 |
| 1.1.3 膜结合焦磷酸酶（H+-PPases）的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.1.4 动物及微生物无机焦磷酸酶的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.1.5 植物无机焦磷酸酶（PPase）的研究进展 | 第14页 |
| 1.2 层析技术简介 | 第14-16页 |
| 1.2.2 金属螯合亲和层析（IMAC） | 第15页 |
| 1.2.3 金属螯合亲和层析特点及应用 | 第15-16页 |
| 1.3 PCR 增强剂 | 第16-21页 |
| 1.3.1 PCR 增强剂概述 | 第16页 |
| 1.3.2 PCR 增强剂类型及主要功能 | 第16-21页 |
| 1.4 立题依据及研究意义 | 第21-22页 |
| 1.4.1 立题的目的、意义 | 第21页 |
| 1.4.2 研究的主要内容 | 第21-22页 |
| 第二章 无机焦磷酸酶表达载体的构建 | 第22-29页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第22-24页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第22页 |
| 2.1.2 工具酶和主要药品 | 第22页 |
| 2.1.3 主要溶液的配方 | 第22-24页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-26页 |
| 2.2.1 TSS 法大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第24页 |
| 2.2.2 利用 pET28a 构建嗜热菌无机焦磷酸酶的表达载体 | 第24-25页 |
| 2.2.3 rPPase 蛋白的诱导表达 | 第25页 |
| 2.2.4 SDS-PAGE 电泳 | 第25-26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-28页 |
| 2.3.1 嗜热菌无机焦磷酸酶原核表达载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.3.2 重组无机焦磷酸酶 rPPase 诱导表达 | 第27-28页 |
| 2.3.3 诱导时间对 rPPase 重组蛋白表达量的影响 | 第28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 rPPase 的纯化与活性分析 | 第29-36页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第29-30页 |
| 3.1.1 工具酶和主要药品 | 第29页 |
| 3.1.2 主要溶液的配方 | 第29-30页 |
| 3.1.3 仪器 | 第30页 |
| 3.2 实验方法及步骤 | 第30-31页 |
| 3.2.1 融合蛋白的纯化 | 第30页 |
| 3.2.2 rPPase 蛋白的活性及含量测定 | 第30-31页 |
| 3.3 结果与分析 | 第31-35页 |
| 3.3.1 SDS-PAGE 检测纯化的 rPPase | 第31-32页 |
| 3.3.2 rPPase 水解活性测定 | 第32-33页 |
| 3.3.3 rPPase 蛋白含量测定 | 第33页 |
| 3.3.4 pH 值对 rPPase 活性的影响 | 第33-34页 |
| 3.3.5 温度对 rPPase 活性的影响 | 第34页 |
| 3.3.6 rPPase 的 Km和 Vmax的测定 | 第34-35页 |
| 3.4 讨论 | 第35-36页 |
| 第四章 rPPase 对不同 DNA 聚合酶扩增效率的影响 | 第36-42页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第36页 |
| 4.1.1 工具酶和主要药品 | 第36页 |
| 4.1.2 主要溶液配方 | 第36页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第36页 |
| 4.2 实验方法 | 第36-37页 |
| 4.2.1 半定量 PCR 检测 rPPase 对不同 DNA 聚合酶扩增效率的影响 | 第36-37页 |
| 4.2.2 实时定量 PCR 检测 rPPase 对不同 DNA 聚合酶扩增效率的影响 | 第37页 |
| 4.3 结果与分析 | 第37-41页 |
| 4.3.1 半定量 PCR 检测 rPPase 对不同 DNA 聚合酶扩增效率的影响 | 第37-38页 |
| 4.3.2 实时定量 PCR 检测 rPPase 对不同 DNA 聚合酶扩增效率的影响 | 第38-41页 |
| 4.4 讨论 | 第41-42页 |
| 第五章 结论与展望 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-52页 |
| 附录 | 第52-53页 |
| 缩略词 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简介 | 第55页 |
