| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩写词表 | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-19页 |
| ·2型糖尿病的流行病学、治疗及预后 | 第9-11页 |
| ·GLP-1与Exendin 4的提出 | 第11-15页 |
| ·其他GLP-1受体激动剂研究现状 | 第15-16页 |
| ·抗2型糖尿病多肽GLP-1及Exendin-4的合成 | 第16-19页 |
| 第二章 前期研究:本论文的设计思想 | 第19-31页 |
| ·建GLP-1受体激动剂疗效的评估方法 | 第19-21页 |
| ·离体测定EC_(50)及IC_(50) | 第19-20页 |
| ·抗体测定法 | 第20-21页 |
| ·Exendin-4的C末端是否一定需要酰胺化? | 第21-23页 |
| ·具有相同降糖有效持续时间的最短的Exendin1-4类似物的肽链长度是32个氨基酸 | 第23-27页 |
| ·GLP-1及其类似物多肽链的长度研究 | 第23-24页 |
| ·Exendin-4及其类似物多肽链的长度研究 | 第24-27页 |
| ·具有与Exendin-4等效的类似物的设计 | 第27-28页 |
| ·EW(1-32)表达系统的选择 | 第28-31页 |
| ·EW(1-32)基因工程菌的选择 | 第28-29页 |
| ·EW(1-32)表达载体的选择 | 第29-31页 |
| 第三章 基因工程制备EW的材料与方法 | 第31-43页 |
| ·Exendin-4类似物EW(1-32)基因工程制备的研究 | 第31-36页 |
| ·菌株和质粒 | 第31页 |
| ·材料与试剂 | 第31-32页 |
| ·溶液及试剂配制 | 第32-35页 |
| ·LB培养基 | 第32-33页 |
| ·蛋白质电泳 | 第33-34页 |
| ·发酵过程中所需要的试剂 | 第34-35页 |
| ·主要仪器 | 第35-36页 |
| ·其他 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-42页 |
| ·菌株及质粒 | 第36页 |
| ·酶及培养基 | 第36页 |
| ·构建EW基因 | 第36-37页 |
| ·构建含8个EW拷贝的基因序列及感受态大肠杆菌表达菌株 | 第37-38页 |
| ·构建EW基因的其他设想及尝试 | 第38-39页 |
| ·基因工程菌的发酵及EW融合蛋白的表达 | 第39-40页 |
| ·烧瓶内发酵 | 第39页 |
| ·发酵罐(20L或100L)发酵 | 第39-40页 |
| ·融合蛋白电泳 | 第40页 |
| ·细胞破碎 | 第40-41页 |
| ·纯化包涵体 | 第41页 |
| ·包涵体冻干 | 第41页 |
| ·保护多肽链中的赖氨酸基团不被胰蛋白酶酶解 | 第41-42页 |
| ·采用高纯度的胰蛋白酶进行融合蛋白的切断 | 第42页 |
| ·EW(1-32)的纯化研究 | 第42页 |
| ·EW(1-32)的产品性质分析 | 第42-43页 |
| 第四章 基因工程制备EW的结果 | 第43-54页 |
| ·构建EW(1-32)基因 | 第43页 |
| ·连接EW基因至8个拷贝 | 第43-45页 |
| ·构建EW基因的其他设想及尝试 | 第45-46页 |
| ·表达含8个EW基因的融合蛋白 | 第46-50页 |
| ·锥形摇瓶内发酵 | 第46-47页 |
| ·发酵罐内(20L或100L)发酵 | 第47-48页 |
| ·有关高密度发酵的思考 | 第48-50页 |
| ·大肠杆菌:细胞破壁 | 第50页 |
| ·纯化包涵体 | 第50-51页 |
| ·多肽链中赖氨酸基团的保护及包涵体的增溶 | 第51页 |
| ·胰蛋白酶对融合蛋白进行酶切 | 第51-54页 |
| 第五章 EW(1-32)理化特性的研究 | 第54-57页 |
| ·EW(1-32)的测试HPLC图形 | 第54-55页 |
| ·EW(1-32)的飞行质谱MALDI-MS | 第55-56页 |
| ·EW(1-32)全序列分析 | 第56-57页 |
| 第六章 EW(1-32)生物活性研究 | 第57-61页 |
| ·体内降糖作用的血浆葡萄糖测定 | 第57-59页 |
| ·C57BL鼠中的EW(1-32)降糖作用 | 第57-58页 |
| ·db/db小鼠中的EW(1-32)降糖作用 | 第58-59页 |
| ·C57BL小鼠中的EW(1-32)胰岛素增敏作用 | 第59-60页 |
| ·EW(1-32)的急慢性毒性实验(小鼠实验) | 第60-61页 |
| 第七章 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
| 综述 | 第67-80页 |
| 参考文献 | 第76-80页 |
| 附图 | 第80-82页 |
| 已发表的论文 | 第82-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
