| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 水稻黑条矮缩病毒研究进展 | 第10-13页 |
| 1.1.1 水稻黑条矮缩病的发生及危害 | 第10页 |
| 1.1.2 水稻黑条矮缩病毒的分子生物学研究进展 | 第10-12页 |
| 1.1.3 介体灰飞虱的生物学特性 | 第12-13页 |
| 1.2 植物病毒的昆虫介体传播机制研究进展 | 第13-17页 |
| 1.2.1 病毒自身编码的传播决定因子 | 第13-15页 |
| 1.2.2 昆虫的特异性病毒受体蛋白 | 第15-16页 |
| 1.2.3 共生微生物 | 第16-17页 |
| 1.3 分析蛋白互作的方法 | 第17-21页 |
| 1.3.1 酵母双杂交(YTH) | 第17-19页 |
| 1.3.2 Pull-down | 第19页 |
| 1.3.3 免疫共沉淀(Co-IP) | 第19-20页 |
| 1.3.4 分子荧光互补技术(BiFC) | 第20-21页 |
| 1.3.5 病毒覆盖(Virus gel overlay assay) | 第21页 |
| 1.4 研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 灰飞虱蛋白与RBSDV P10的互作关系分析 | 第22-36页 |
| 摘要 | 第22页 |
| 2.1 材料与方法 | 第22-27页 |
| 2.1.1 材料及试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.2 酵母双杂交分析 | 第23-24页 |
| 2.1.3 原核表达载体的构建 | 第24-25页 |
| 2.1.4 重组蛋白的原核表达 | 第25-26页 |
| 2.1.5 Western blotting | 第26页 |
| 2.1.6 RBSDV病汁液的粗提取及表达蛋白的病毒覆盖检测 | 第26-27页 |
| 2.2 结果与分析 | 第27-33页 |
| 2.2.1 灰飞虱蛋白与P10的酵母双杂交分析 | 第27-30页 |
| 2.2.2 病毒覆盖分析互作蛋白与病毒粒子间的互作关系 | 第30-33页 |
| 2.3 讨论 | 第33-36页 |
| 第三章 灰飞虱蛋白与SRBSDV的互作关系分析 | 第36-44页 |
| 摘要 | 第36页 |
| 3.1 材料与方法 | 第36-39页 |
| 3.1.1 材料及试剂 | 第36-37页 |
| 3.1.2 灰飞虱基因与SP1O的酵母双杂交分析 | 第37页 |
| 3.1.3 双分子荧光互补(BiFC)实验 | 第37-39页 |
| 3.2 结果与分析 | 第39-42页 |
| 3.2.1 互作基因全长与SRBSDV SP10蛋白互作分析 | 第39-40页 |
| 3.2.2 双分子荧光互补验证蛋白互作 | 第40-42页 |
| 3.3 讨论 | 第42-44页 |
| 第四章 RBSDV对RACK表达影响的分析 | 第44-53页 |
| 摘要 | 第44页 |
| 4.1 材料与方法 | 第44-47页 |
| 4.1.1 材料及试剂 | 第44-45页 |
| 4.1.2 饲毒实验 | 第45页 |
| 4.1.3 灰飞虱总RNA提取 | 第45页 |
| 4.1.4 Real-time PCR分析 | 第45-46页 |
| 4.1.5 ELISA(酶联免疫法)检测灰飞虱带毒率 | 第46页 |
| 4.1.6 dsRNA的合成 | 第46-47页 |
| 4.1.7 dsRNA饲喂灰飞虱 | 第47页 |
| 4.2 结果与分析 | 第47-50页 |
| 4.2.1 RACK基因的表达与虫龄的关系 | 第47页 |
| 4.2.2 不同龄期灰飞虱带毒能力比较 | 第47-48页 |
| 4.2.3 RBSDV侵染对不同龄期灰飞虱RACK表达的影响 | 第48-49页 |
| 4.2.4 dsRNA干扰分析RACK对灰飞虱带毒率的影响 | 第49-50页 |
| 4.3 讨论 | 第50-53页 |
| 第五章 灰飞虱Tm蛋白的基因克隆,原核表达和抗体制备 | 第53-64页 |
| 摘要 | 第53页 |
| 5.1 材料与方法 | 第53-56页 |
| 5.1.1 材料及试剂 | 第53页 |
| 5.1.2 灰飞虱Tm ORF的克隆及序列分析 | 第53-54页 |
| 5.1.3 Tm原核表达载体的构建 | 第54页 |
| 5.1.4 菌株的诱导表达 | 第54页 |
| 5.1.5 蛋白纯化 | 第54页 |
| 5.1.6 Tm蛋白抗血清的制备 | 第54-55页 |
| 5.1.7 效价测定 | 第55页 |
| 5.1.8 DIBA法检测抗体的灵敏度 | 第55页 |
| 5.1.9 Western blotting特异性检测 | 第55-56页 |
| 5.2 结果与分析 | 第56-62页 |
| 5.2.1 Tm基因的序列分析 | 第56页 |
| 5.2.2 Tm基因的克隆及分析 | 第56-57页 |
| 5.2.3 pET32a-Tm原核表达载体的构建 | 第57-58页 |
| 5.2.4 Tm融合蛋白的诱导表达 | 第58页 |
| 5.2.5 融合蛋白的可溶性分析 | 第58-59页 |
| 5.2.6 融合蛋白的纯化 | 第59-60页 |
| 5.2.7 抗血清效价的测定 | 第60页 |
| 5.2.8 DIBA法检测灰飞虱 | 第60-61页 |
| 5.2.9 多克隆抗体的Western blotting检测 | 第61-62页 |
| 5.3 讨论 | 第62-64页 |
| 全文总结 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-78页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
