| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 引言 | 第9-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 植物耐盐性机理 | 第11-13页 |
| 1.1.1 渗透调节 | 第11-12页 |
| 1.1.2 离子区域化 | 第12页 |
| 1.1.3 信号类物质 | 第12-13页 |
| 1.2 植物抗旱性机理 | 第13-16页 |
| 1.2.1 渗透调节 | 第14页 |
| 1.2.2 气孔调节 | 第14页 |
| 1.2.3 抗氧化机制 | 第14-15页 |
| 1.2.4 保护酶体系 | 第15页 |
| 1.2.5 脱落酸(ABA)途径 | 第15-16页 |
| 1.3 Apyrase的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.3.1 Apyrase的功能研究 | 第16-17页 |
| 1.3.2 信号分子eATP | 第17页 |
| 1.3.3 Apyrase与气孔运动 | 第17-18页 |
| 1.4 ABA信号传导网络 | 第18-21页 |
| 1.4.1 ABA作用机理 | 第18-19页 |
| 1.4.2 逆境胁迫下ABA的转录调控 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 植物材料与培养 | 第21页 |
| 2.1.2 载体和菌株 | 第21页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.4 酶、试剂和试剂盒 | 第22页 |
| 2.1.5 培养基与主要溶液的配置 | 第22-23页 |
| 2.1.6 常用抗生素配制 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-34页 |
| 2.2.1 PeAPYl与PeAPY2基因的克隆 | 第24-26页 |
| 2.2.1.1 设计引物 | 第24页 |
| 2.2.1.2 胡杨总RNA的提取 | 第24页 |
| 2.2.1.3 逆转录反应 | 第24-25页 |
| 2.2.1.4 基因ORF区扩增 | 第25页 |
| 2.2.1.5 PCR扩增产物的回收 | 第25页 |
| 2.2.1.6 测序 | 第25-26页 |
| 2.2.2 拟南芥PeAPY1与PeAPY2转基因株系的构建与筛选 | 第26页 |
| 2.2.3 PeAPY基因生物信息学分析 | 第26-27页 |
| 2.2.4 PeAPY1蛋白的原核表达与纯化 | 第27-30页 |
| 2.2.4.1 PeAPY1基因的扩增 | 第27页 |
| 2.2.4.2 PCR产物的纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.4.3 PeAPY1 DNA和表达载体的双酶切和纯化 | 第28页 |
| 2.2.4.4 目的片段与载体连接 | 第28页 |
| 2.2.4.5 重组质粒转化大肠杆菌 | 第28页 |
| 2.2.4.6 酶切验证重组质粒 | 第28页 |
| 2.2.4.7 融合蛋白的诱导表达(参考公司说明书） | 第28-29页 |
| 2.2.4.8 GST-Tag融合蛋白的纯化 | 第29页 |
| 2.2.4.9 His-Tag融合蛋白的纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.5 PeAPY1蛋白的酶活测定及影响因素 | 第30-31页 |
| 2.2.5.1 Bradford法测蛋白浓度 | 第30页 |
| 2.2.5.2 制胶和电泳 | 第30-31页 |
| 2.2.5.3 PeAPY1蛋白酶活测定 | 第31页 |
| 2.2.6 转基因拟南芥耐盐性分析 | 第31-32页 |
| 2.2.6.1 种子萌发率 | 第31-32页 |
| 2.2.6.2 幼苗生长和盐处理 | 第32页 |
| 2.2.7 转基因拟南芥耐旱性和失水率测定 | 第32页 |
| 2.2.7.1 干旱处理 | 第32页 |
| 2.2.7.2 失水率测定 | 第32页 |
| 2.2.8 拟南芥ABA处理实验 | 第32页 |
| 2.2.8.1 种子萌发实验 | 第32页 |
| 2.2.8.2 幼苗生长实验 | 第32页 |
| 2.2.9 ABA处理下气孔开度测定 | 第32-34页 |
| 2.2.9.1 ABA促进气孔关闭 | 第33页 |
| 2.2.9.2 ABA抑制气孔开放 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-53页 |
| 3.1 基因PeAPY1和PeAPY1的克隆及其生物信息学分析 | 第34-40页 |
| 3.1.1 基因PeAPY1和PeAPY1的克隆 | 第34-36页 |
| 3.1.2 PeAPY的同源性比对与分析 | 第36-39页 |
| 3.1.3 PeAPY1和PeAPY2蛋白的三级结构预测 | 第39-40页 |
| 3.2 PeAPY1蛋白的原核表达纯化及蛋白性质分析 | 第40-43页 |
| 3.2.1 原核重组质粒的鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2.2 重组PeAPY1蛋白表达纯化 | 第41页 |
| 3.2.3 PeAPY1蛋白的酶活测定 | 第41-43页 |
| 3.3 PeAPY基因过表达株系的抗盐性 | 第43-45页 |
| 3.4 拟南芥PeAPY过表达株系对ABA超敏 | 第45-48页 |
| 3.5 ABA处理下不同株系的气孔运动 | 第48-51页 |
| 3.6 拟南芥PeAPY过表达植株的耐旱性和保水性 | 第51-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 5 结论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 个人简介 | 第65-66页 |
| 导师简介 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
