| 英文缩写词表 | 第10-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 第1章 绪论 | 第15-28页 |
| 1.1 骨质疏松症的发病及现状 | 第15-19页 |
| 1.1.1 骨质疏松症分类 | 第15-16页 |
| 1.1.2 骨质疏松症的发病状况及其危害 | 第16-17页 |
| 1.1.3 骨质疏松症的发病机制 | 第17-18页 |
| 1.1.4 骨质疏松症的药物治疗 | 第18-19页 |
| 1.2 低频电磁场促进骨形成的研究 | 第19-21页 |
| 1.2.1 电磁场防治骨质疏松症的临床应用研究 | 第19-20页 |
| 1.2.2 电磁场促进骨形成的机制 | 第20-21页 |
| 1.3 初级纤毛 | 第21-23页 |
| 1.3.1 初级纤毛简介 | 第21-22页 |
| 1.3.2 初级纤毛的功能 | 第22页 |
| 1.3.3 电磁场通过初级纤毛调节骨形成 | 第22-23页 |
| 1.4 雌激素受体(ER) | 第23-26页 |
| 1.4.1 雌激素受体结构和功能 | 第24-25页 |
| 1.4.2 ERα促进骨形成 | 第25页 |
| 1.4.3 雌激素受体α与IGF-1R的关系 | 第25-26页 |
| 1.5 存在的问题 | 第26-27页 |
| 1.6 本课题主要研究内容 | 第27-28页 |
| 第2章 雌激素受体参与了PEMFs促进骨形成的过程 | 第28-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第28页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-34页 |
| 2.2.1 大鼠颅骨成骨细胞的分离与培养 | 第29-30页 |
| 2.2.2 磁场最佳干预时间的筛选 | 第30页 |
| 2.2.3 ICI182780对成骨细胞预处理 | 第30页 |
| 2.2.4 碱性磷酸酶(ALP)活性的测定 | 第30页 |
| 2.2.5 Westernblot蛋白分析 | 第30-31页 |
| 2.2.6 RealTimeRT-PCR分析 | 第31-33页 |
| 2.2.7 碱性磷酸酶染色 | 第33页 |
| 2.2.8 茜素红钙化结节染色 | 第33-34页 |
| 2.2.9 统计学分析 | 第34页 |
| 2.3 结果 | 第34-39页 |
| 2.3.1 最佳干预时间筛选结果 | 第34-35页 |
| 2.3.2 碱性磷酸酶活性测定结果 | 第35页 |
| 2.3.3 Westernblot蛋白检测结果 | 第35-37页 |
| 2.3.4 RealTimeRT-PCR基因检测结果 | 第37-38页 |
| 2.3.5 碱性磷酸酶染色结果 | 第38页 |
| 2.3.6 茜素红钙化结节染色结果 | 第38-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-41页 |
| 第3章 PEMFs通过ERα促进体外培养成骨细胞成熟矿化 | 第41-54页 |
| 3.1 实验材料 | 第41页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第41页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第41页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第41页 |
| 3.2 试验方法 | 第41-45页 |
| 3.2.1 大鼠颅骨成骨细胞的分离与培养 | 第42页 |
| 3.2.2 PEMFs促进骨形成对雌二醇含量及雌激素受体α的影响 | 第42页 |
| 3.2.3 ERαsiRNA质粒载体构建及其制备 | 第42-43页 |
| 3.2.4 ERαsiRNA重组质粒转染至ROBs细胞 | 第43-44页 |
| 3.2.5 成骨性分化分析 | 第44页 |
| 3.2.6 碱性磷酸酶(ALP)活性的测定 | 第44页 |
| 3.2.7 Westernblot蛋白分析 | 第44页 |
| 3.2.8 RealTimeRT-PCR分析 | 第44-45页 |
| 3.2.9 碱性磷酸酶染色 | 第45页 |
| 3.2.10 茜素红钙化结节染色 | 第45页 |
| 3.2.11 统计学分析 | 第45页 |
| 3.3 结果 | 第45-52页 |
| 3.3.1 PEMFs对雌激素和雌激素受体α的影响 | 第45-47页 |
| 3.3.1.1 细胞水平实验结果 | 第45-46页 |
| 3.3.1.2 动物水平实验结果 | 第46-47页 |
| 3.3.2 最佳干扰序列筛选结果 | 第47-48页 |
| 3.3.3 PEMFs对ERα表达抑制ROBs细胞的ERα表达分析 | 第48页 |
| 3.3.4 PEMFs对ERα表达抑制的ROBs细胞ALP活性的影响 | 第48-49页 |
| 3.3.5 PEMFs对ERα表达抑制的ROBs细胞中成骨相关基因和蛋白结果 | 第49-50页 |
| 3.3.6 PEMFs对ERα表达抑制的ROBs细胞碱性磷酸酶染色结果 | 第50-51页 |
| 3.3.7 PEMFs对ERα表达抑制的ROBs细胞茜素红钙化结节染色结果 | 第51-52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-54页 |
| 第4章 IGF-1R参与了PEMFs促进体外培养大鼠成骨细胞成熟与矿化的过程 | 第54-62页 |
| 4.1 实验材料 | 第54页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第54页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第54页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第54页 |
| 4.2 实验方法 | 第54-56页 |
| 4.2.1 大鼠颅骨成骨细胞的分离培养 | 第54页 |
| 4.2.2 成骨性分化分析 | 第54-55页 |
| 4.2.3 ALP活性的测定 | 第55页 |
| 4.2.4 Westernblot蛋白测定 | 第55页 |
| 4.2.5 RealTimeRT-PCR基因检测 | 第55页 |
| 4.2.6 碱性磷酸酶染色 | 第55页 |
| 4.2.7 茜素红钙化结节染色 | 第55-56页 |
| 4.2.8 统计学分析 | 第56页 |
| 4.3 结果 | 第56-60页 |
| 4.3.1 阻断IGF-1R后PEMFs对ALP活性的影响 | 第56页 |
| 4.3.2 Westernblot成骨相关蛋白检测结果 | 第56-58页 |
| 4.3.3 RealTimeRT-PCR基因检测结果 | 第58-59页 |
| 4.3.4 碱性磷酸酶染色结果 | 第59页 |
| 4.3.5 茜素红钙化结节染色结果 | 第59-60页 |
| 4.4 讨论 | 第60-62页 |
| 第5章 PEMFs促进细胞成熟矿化过程中激活ERK1/2信号通路 | 第62-72页 |
| 5.1 实验材料 | 第62页 |
| 5.1.1 实验动物 | 第62页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第62页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第62页 |
| 5.2 实验方法 | 第62-64页 |
| 5.2.1 大鼠颅骨成骨细胞的分离培养 | 第63页 |
| 5.2.2 成骨性分化分析 | 第63页 |
| 5.2.3 ALP活性的测定 | 第63页 |
| 5.2.4 Westernblot蛋白测定 | 第63页 |
| 5.2.5 RealTimeRT-PCR基因检测 | 第63-64页 |
| 5.2.6 碱性磷酸酶染色 | 第64页 |
| 5.2.7 茜素红钙化结节染色 | 第64页 |
| 5.2.8 统计学分析 | 第64页 |
| 5.3 结果 | 第64-70页 |
| 5.3.1 阻断ERK1/2后PEMFs对ALP活性的影响 | 第64-65页 |
| 5.3.2 Westernblot成骨相关蛋白检测结果 | 第65-66页 |
| 5.3.3 RealTimeRT-PCR基因检测结果 | 第66-67页 |
| 5.3.4 碱性磷酸酶染色结果 | 第67-68页 |
| 5.3.5 茜素红钙化结节染色结果 | 第68-69页 |
| 5.3.6 阻断ERK1/2对相关信号通路信号蛋白的影响 | 第69-70页 |
| 5.4 讨论 | 第70-72页 |
| 第6章 PEMFs通过初级纤毛促进骨形成过程中激活了ERα/IGF-1R信号通路 | 第72-83页 |
| 6.1 实验材料 | 第72页 |
| 6.1.1 实验动物 | 第72页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第72页 |
| 6.1.3 主要仪器 | 第72页 |
| 6.2 实验方法 | 第72-74页 |
| 6.2.1 大鼠颅骨成骨细胞的分离培养 | 第72-73页 |
| 6.2.2 siRNAIFT88质粒提取 | 第73页 |
| 6.2.3 Westernblot蛋白测定 | 第73页 |
| 6.2.4 初级纤毛与IGF-1R免疫荧光共定位 | 第73-74页 |
| 6.2.5 对成骨细胞中IFT88进行RNAi后免疫组织化学染色 | 第74页 |
| 6.2.6 细胞核蛋白的提取 | 第74页 |
| 6.2.7 统计学分析 | 第74页 |
| 6.3 结果 | 第74-81页 |
| 6.3.1 初级纤毛与IGF-1R共定位结果 | 第74-75页 |
| 6.3.2 干扰IFT88结果 | 第75-76页 |
| 6.3.3 干扰IFT88后初级纤毛发生率统计结果 | 第76页 |
| 6.3.4 对IFT88进行RNAi后对相关信号通路信号蛋白的影响 | 第76-78页 |
| 6.3.5 对IFT88进行RNAi后PEMFs对pERα核转位影响 | 第78-79页 |
| 6.3.6 阻断IGF-1R对相关信号通路信号蛋白的影响 | 第79-80页 |
| 6.3.7 干扰掉Erα后对IGF-1R/ERK12信号途径的影响 | 第80-81页 |
| 6.4 讨论 | 第81-83页 |
| 结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 附录 A 攻读学位期间所发表的学术论文目录 | 第95页 |
