| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略词对照表 | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-25页 |
| 一、植物蛋白水解酶研究进展 | 第11-16页 |
| 1.1 蛋白水解酶的分类 | 第11-12页 |
| 1.2 与植物衰老相关的蛋白水解酶的研究进展 | 第12-16页 |
| 1.2.1 半胱氨酸蛋白酶与植物衰老 | 第13-14页 |
| 1.2.2 丝氨酸蛋白酶与植物衰老 | 第14-15页 |
| 1.2.3 其他蛋白酶与植物衰老 | 第15-16页 |
| 二、植物SUBTILASE家族丝氨酸蛋白酶研究进展 | 第16-23页 |
| 2.1 植物丝氨酸蛋白酶简述 | 第16页 |
| 2.2 植物枯草杆菌类蛋白酶简述 | 第16-17页 |
| 2.3 植物SUBTILASE家族丝氨酸蛋白酶研究技术和方法 | 第17-23页 |
| 2.3.1 明胶-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Gelation-SDS-PAGE)定性分析 | 第17-18页 |
| 2.3.2 紫外分光光度计法或荧光分光度计法定量分析 | 第18-19页 |
| 2.3.3 质谱鉴定 | 第19页 |
| 2.3.4 重组表达 | 第19-20页 |
| 2.3.5 在细菌表达系统中的表达 | 第20-21页 |
| 2.3.6 Western-blot | 第21-23页 |
| 三、研究目的和意义 | 第23-25页 |
| 第一章 重组TASSP1-F蛋白的表达与纯化 | 第25-41页 |
| 1 材料与方法 | 第25-32页 |
| 1.1 材料 | 第25-28页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 1.1.2 菌株与载体 | 第25页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第25-26页 |
| 1.1.4 溶液配置 | 第26-28页 |
| 1.1.5 仪器 | 第28页 |
| 1.2 实验方法 | 第28-32页 |
| 1.2.1 原核重组表达载体pET30a-TaSSP1-f的转化 | 第28-30页 |
| 1.2.2 DNA序列的测定 | 第30页 |
| 1.2.3 所用生物信息学软件 | 第30页 |
| 1.2.4 带有His标签重组蛋白的诱导表达及检测 | 第30-31页 |
| 1.2.5 TaSSP1-f重组蛋白诱导表达条件的优化 | 第31页 |
| 1.2.6 TaSSP1-f重组蛋白在菌体中的主要存在形式的判定 | 第31页 |
| 1.2.7 可溶性目的蛋白和包涵体的纯化 | 第31-32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-39页 |
| 2.1 pET30a-TaSSP1-f质粒的鉴定 | 第32-34页 |
| 2.2 TaSSP1-f蛋白诱导条件优化表达及可溶性分析 | 第34-37页 |
| 2.3 可溶性目的蛋白和包涵体的纯化 | 第37-39页 |
| 3 小结 | 第39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| 第二章 TASSP1-F的多克隆抗体制备及其应用检测 | 第41-51页 |
| 1 材料与方法 | 第41-45页 |
| 1.1 材料 | 第41-42页 |
| 1.1.1 动物材料 | 第41页 |
| 1.1.2 植物材料 | 第41页 |
| 1.1.3 抗原 | 第41页 |
| 1.1.4 主要试剂 | 第41页 |
| 1.1.5 溶液配置 | 第41-42页 |
| 1.1.6 仪器 | 第42页 |
| 1.2 实验方法 | 第42-45页 |
| 1.2.1 免疫方法 | 第42-43页 |
| 1.2.2 琼脂双扩散实验方法 | 第43页 |
| 1.2.3 分离血清 | 第43页 |
| 1.2.4 叶片暗诱导衰老处理 | 第43页 |
| 1.2.5 粗酶液的提取 | 第43-44页 |
| 1.2.6 蛋白酶明胶-SDS-聚丙烯酰胺凝胶活性电泳 | 第44页 |
| 1.2.7 蛋白酶Western-blot检测 | 第44页 |
| 1.2.8 SDS-PAGE测定蛋白酶的分子量 | 第44-45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-48页 |
| 2.1 多克隆抗体的特异性分析 | 第45-47页 |
| 2.2 SDS-PAGE测定蛋白质的分子最 | 第47-48页 |
| 2.3 暗诱导衰老叶片中蛋白酶Western-blot检测及明胶-SDS-PAGE活性分析 | 第48页 |
| 3 小结 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 全文结论 | 第51-53页 |
| 创新之处 | 第53-55页 |
| 存在问题和展望 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
