摘要 | 第1-6页 |
ABSTRACT | 第6-10页 |
缩略词表 | 第10-12页 |
引言 | 第12-14页 |
第一部分 TNFAIP8 家族基因在白血病患者 PBMC 标本中的表达分析 | 第14-26页 |
·前言 | 第14页 |
·材料 | 第14-15页 |
·主要试剂 | 第14页 |
·仪器设备 | 第14-15页 |
·方法 | 第15-21页 |
·引物设计 | 第15页 |
·白血病患者及健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC)标本的采集 | 第15-16页 |
·标本外周血单个核细胞(PBMC)总 RNA 的提取 | 第16-17页 |
·RT-PCR 扩增 TNFAIP8 家族基因 | 第17-18页 |
·回收目的基因片段 | 第18页 |
·连接反应 | 第18页 |
·感受态细胞的制备 | 第18-20页 |
·转化 | 第20页 |
·挑取及鉴定克隆 | 第20页 |
·半定量 Duplex PCR 检测 TIPE2 基因的表达量 | 第20-21页 |
·实时荧光定量 PCR 检测 TNFAIP8 家族基因的表达量 | 第21页 |
·统计学分析方法 | 第21页 |
·结果 | 第21-24页 |
·TNFAIP8 家族基因的扩增 | 第21-22页 |
·TIPE2 PCR 产物与 T 载体连接的测序结果 | 第22页 |
·TIPE2 的半定量 Duplex PCR 结果 | 第22-23页 |
·TIPE2 的定量 PCR 结果分析 | 第23-24页 |
·讨论 | 第24-26页 |
第二部分 TIPE2 基因沉默载体的构建及其对 Jurkat 细胞的影响 | 第26-46页 |
·前言 | 第26-27页 |
·材料及试剂 | 第27-31页 |
·主要试剂 | 第27页 |
·仪器设备 | 第27-28页 |
·主要溶液的配制 | 第28-31页 |
·方法 | 第31-37页 |
·基因沉默功能序列设计与合成 | 第31页 |
·TIPE2 基因沉默载体的构建 | 第31-33页 |
·细胞培养和转染 | 第33-34页 |
·BCA 法测定蛋白质浓度 | 第34页 |
·SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第34-35页 |
·免疫印迹杂交 | 第35-36页 |
·WST 细胞生长曲线 | 第36页 |
·流式细胞术检测细胞周期 | 第36页 |
·流式细胞术检测细胞凋亡 | 第36-37页 |
·结果 | 第37-43页 |
·测序结果 | 第37页 |
·TIPE2 基因沉默的 PCR、免疫印迹验证结果 | 第37-38页 |
·TIPE2 的定量 PCR 结果分析 | 第38页 |
·Image pro plus 6 软件对细胞体积的分析 | 第38-39页 |
·WST 检测 TIPE2 基因沉默对 Jurkat 细胞生长情况的影响 | 第39-40页 |
·TNFAIP8 家族其它成员 mRNA 表达检测 | 第40页 |
·流式细胞仪检测细胞周期 | 第40-41页 |
·流式细胞仪检测细胞的凋亡 | 第41-42页 |
·Western blot 分析结果 | 第42-43页 |
·讨论 | 第43-46页 |
结论 | 第46-48页 |
参考文献 | 第48-50页 |
第四部分 文献综述 | 第50-60页 |
一、TNFAIP8 家族的特点 | 第50-51页 |
二、TIPE 的生物学功能 | 第51-55页 |
三、TIPE1 的生物功能 | 第55页 |
四、TIPE2 的生物功能 | 第55-57页 |
五、小结 | 第57页 |
参考文献 | 第57-60页 |
致谢 | 第60-61页 |
在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第61-62页 |