| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-28页 |
| 1 引言 | 第13页 |
| 2 蛋白质相互作用研究传统技术 | 第13-22页 |
| 2.1 酵母双杂交技术 | 第14-16页 |
| 2.1.1 原理 | 第14页 |
| 2.1.2 应用 | 第14-16页 |
| 2.1.3 技术优点 | 第16页 |
| 2.1.4 技术缺陷 | 第16页 |
| 2.2 串联亲和纯化技术 | 第16-19页 |
| 2.2.1 原理 | 第16-17页 |
| 2.2.2 应用 | 第17-18页 |
| 2.2.2.1 研究酵母蛋白相互作用 | 第17-18页 |
| 2.2.2.2 研究高等真核生物蛋白相互作用 | 第18页 |
| 2.2.2.3 研究其他生物中蛋白相互作用 | 第18页 |
| 2.2.3 技术优点 | 第18-19页 |
| 2.2.4 技术缺陷 | 第19页 |
| 2.3 GST pull-down技术 | 第19-20页 |
| 2.3.1 原理 | 第19页 |
| 2.3.2 应用 | 第19-20页 |
| 2.3.3 技术优点 | 第20页 |
| 2.3.4 技术缺陷 | 第20页 |
| 2.4 免疫共沉淀技术 | 第20-22页 |
| 2.4.1 原理 | 第21页 |
| 2.4.2 应用 | 第21页 |
| 2.4.3 抗体选择 | 第21-22页 |
| 2.4.4 技术优点 | 第22页 |
| 2.4.5 技术缺陷 | 第22页 |
| 3 蛋白质相互作用研究新技术 | 第22-27页 |
| 3.1 蛋白质芯片 | 第23-24页 |
| 3.1.1 原理 | 第23页 |
| 3.1.2 应用 | 第23-24页 |
| 3.1.3 技术优点 | 第24页 |
| 3.1.4 技术缺陷 | 第24页 |
| 3.2 生物信息学方法 | 第24-27页 |
| 3.2.1 原理 | 第24-25页 |
| 3.2.2 数据库 | 第25页 |
| 3.2.3 细胞定位预测 | 第25-26页 |
| 3.2.4 蛋白相互作用预测 | 第26-27页 |
| 3.2.5 技术优点 | 第27页 |
| 3.2.6 技术缺陷 | 第27页 |
| 4 总结 | 第27-28页 |
| 第二章 实验研究 | 第28-78页 |
| 1 引言 | 第28-31页 |
| 2 实验材料及设备 | 第31-40页 |
| 2.1 质粒 | 第31页 |
| 2.2 菌种 | 第31页 |
| 2.3 实验试剂 | 第31-32页 |
| 2.4 实验试剂的配制 | 第32-38页 |
| 2.5 仪器设备 | 第38-40页 |
| 3 实验方法 | 第40-57页 |
| 3.1 生物信息学分析 | 第40页 |
| 3.2 PCR扩增目的基因 | 第40-43页 |
| 3.2.1 蜗牛酶法提取野生型酵母基因组 | 第40-41页 |
| 3.2.2 引物设计 | 第41页 |
| 3.2.3 PCR反应 | 第41-42页 |
| 3.2.4 琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物 | 第42页 |
| 3.2.5 试剂盒切胶回收PCR产物 | 第42-43页 |
| 3.3 T-A载体的构建 | 第43-46页 |
| 3.3.1 感受态细胞的制备 | 第43-44页 |
| 3.3.2 T-A连接反应 | 第44页 |
| 3.3.3 连接产物转化感受态细胞 | 第44页 |
| 3.3.4 SDS-碱裂解法抽提pMD19T-SLS1 | 第44-46页 |
| 3.4 表达质粒的构建 | 第46-49页 |
| 3.4.1 的基因回收 | 第46页 |
| 3.4.2 线性pET28a回收 | 第46-47页 |
| 3.4.3 SLS1与pET28a连接 | 第47-48页 |
| 3.4.4 连接产物转化TOP10感受态细胞 | 第48页 |
| 3.4.5 SDS-碱裂解法抽提pET28-SLS1质粒 | 第48页 |
| 3.4.6 质粒酶切鉴定 | 第48-49页 |
| 3.4.7 pET28-SLS1转化E.coli BL21感受态细胞 | 第49页 |
| 3.4.8 表达菌的冻存 | 第49页 |
| 3.5 Sls1p的诱导表达 | 第49-52页 |
| 3.5.1 Sls1p的表达鉴定 | 第49-51页 |
| 3.5.2 诱导条件的优化 | 第51页 |
| 3.5.2.1 最适温度确定 | 第51页 |
| 3.5.2.2 最适IPTG浓度及诱导时间确定 | 第51页 |
| 3.5.3 蛋白的大量表达 | 第51-52页 |
| 3.6 蛋白纯化 | 第52-54页 |
| 3.6.1 包涵体的提取及溶解 | 第52页 |
| 3.6.2 最适纯化条件摸索 | 第52-53页 |
| 3.6.3 蛋白的大量纯化 | 第53页 |
| 3.6.4 蛋白复性 | 第53-54页 |
| 3.7 单克隆抗体制备 | 第54-57页 |
| 3.7.1 抗体制备过程 | 第54页 |
| 3.7.2 蛋白样品制备 | 第54-55页 |
| 3.7.3 蛋白浓度测定 | 第55页 |
| 3.7.4 抗体检测 | 第55-57页 |
| 4 实验结果与分析 | 第57-74页 |
| 4.1 生物信息学分析 | 第57-58页 |
| 4.2 PCR扩增与表达载体构建 | 第58-64页 |
| 4.3 蛋白的表达与纯化 | 第64-71页 |
| 4.3.1 蛋白表达鉴定 | 第64页 |
| 4.3.2 不同温度诱导蛋白 | 第64-65页 |
| 4.3.3 不同IPTG浓度诱导不同时间的蛋白表达 | 第65-69页 |
| 4.3.3.1 0.1mmol/L IPTG诱导不同时间 | 第66-67页 |
| 4.3.3.2 0.4mmol/L IPTG诱导不同时间 | 第67-68页 |
| 4.3.3.3 0.7mmol/L IPTG诱导不同时间 | 第68-69页 |
| 4.3.4 最适诱导条件的确定 | 第69页 |
| 4.3.5 蛋白纯化 | 第69-71页 |
| 4.4 抗体制备 | 第71-74页 |
| 4.4.1 蛋白浓度测定 | 第71-72页 |
| 4.4.2 Western blot检测 | 第72-74页 |
| 5 讨论 | 第74-77页 |
| 6 创新点 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-87页 |
| 作者简历 | 第87页 |
